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目的:非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disea- se,NAFLD)发病率逐年升高,该病常与腹型肥胖、2型糖尿病、高脂血症同时存在。近年来研究发现NAFLD与2型糖尿病、胰岛素抵抗密切相关,胰岛素抵抗及2型糖尿病可能是NAFLD形成的启动因素,并且在其形成过程中可能起中心作用。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptorα)PPARα是一种由配体激活的转录因子,属于核受体超家族成员。具有调节脂肪代谢和调节炎症、免疫以及细胞分化等作用,在NAFLD发病起着很重要的作用。肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor-4α, HNF4α)是高度保守的胆固醇/甲状腺激素受体超家族成员,在肝脏、肾脏和肠及胰岛细胞中表达的,其对NAFLD发病起着重要的作用,已有的研究表明,高脂饮食诱导的大鼠胰岛素模型肝脏发生NAFLD变化,肝脏HNF-4αmRNA降低,本研究进一步探明高脂饮食+小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠肝脏的变化及肝脏HNF-4αmRNA及PPARαmRNA表达的变化。噻唑烷二酮类化合物(thiazolidineline,TZD)是一类作用于PPARγ受体,治疗2型糖尿病的新药,为进一步阐明NAFLD的发病机制,并寻找和发现有效防止NAFLD新方法也已经成为医学界研究的重要课题。本研究旨在:1通过高脂饮食喂养+小剂量STZ建立Wistar大鼠2型糖尿病动物模型,该模型具有腹型肥胖、高血糖、高胰岛素血症、高血脂、胰岛素敏感性降低、脂肪肝的特点。2探讨PPARαmRNA及HNF4αmRNA在NAFLD发生时在肝脏表达的变化。3噻唑烷二酮类(thiazolidinedine,TZD)对2型糖尿病及NAFLD的干预作用。方法:健康Wistar雄性大鼠45只,适应性喂养2周后,随机分为普通饮食组(正常对照组A组)15只,和高脂饮食组(实验组)30只,给予高脂饮食喂养8周,按李光伟HOMA指数判断出现胰岛素抵抗后,腹腔注射STZ造模。除意外死亡和未成模者外,将剩余成模大鼠随机分为2组(每组12只):2型糖尿病组(B组),继续高脂饲料喂养;罗格列酮治疗组(C组),高脂饲料喂养同时罗格列酮3mg/kg/d灌胃给药。所有大鼠试验期间自由饮水,进食。分笼饲养,每笼5只。每组大鼠均于实验开始、实验结束时称量体重、取血。大鼠自试验前一日20:00起禁食,实验日8:00分别自内眦静脉采血3毫升,分离血清,保存于-20℃用于各项指标的检测。实验结束时,留取部分肝脏于液氮保存,用于测PPARαmRNA及HNF4αmRNA的表达,其余用多聚甲醛固定,待光镜下组织学检测。1血糖、胰岛素的测定胰岛素用放射免疫法测定。采用稳态模型(Homeoestasis Model Assement,HOMA)及胰岛素敏感指数(Insulin Sensitivity Index,ISI)评价胰岛素抵抗的程度。2血脂的测定甘油三脂(triglyceride TG)总胆固醇(total cholesterole,TC)高密度脂蛋白highdensity lipoprotein-cholesterole HDL-C)比色法测定,低密度脂蛋白胆固醇(lowerdensity lipoprotein-cholesterole ,LDL-C)由Friedewald公式(LDL -C= TC-HDL-TG/2.2)求出以(mmol/l计)。Cu+比色法测定游离脂肪酸(FFAs)含量。3肝脏PPARαmRNA及HNF4αmRNA表达的测定用Trizol Kit提取肝脏组织RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增PPARα、HNF4α和β-actin mRNA,扩增产物经琼脂糖电泳、摄片和计算机图像扫描。RT-PCR产物半定量:因β-actin在组织中均匀表达,PPARα、HNF4α基因的表达水平用靶基因与β-actin的比值表示。4肝脏形态学检查常规方法制备大鼠肝脏光镜组织切片,进行病理学观察。5统计学处理所有数据用SPSS13.0软件处理,计量资料以均数±标准差表示,组间差异用两样本均数的t检验进行比较,两组以上比较采用单因素方差分析和直线相关分析作统计学处理。检验的显著性用P值表示。P<0.05为差异有显著性,P<0.01为差异有极显著性。结果1对体重的影响实验初期,大鼠随机分组,各组体重无统计学差别。实验末期,正常对照组体重明显低于模型组及罗格列酮干预组,有显著性差异(P<0.05)。罗格列酮干预组体重与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。2对血糖和胰岛素的影响STZ造模前各组大鼠空腹血糖无差别。腹腔注射STZ后,模型组与罗格列酮干预组血糖明显高于正常组,有极显著性差异(P<0.01)。罗格列酮干预组血糖低于模型组(P<0.01)。模型组胰岛素水平明显高于正常组与罗格列酮干预组胰岛素水平,有极显著性差异(P<0.01),正常组胰岛素水平较罗格列酮干预组减低(P<0.05)。3对血脂的影响STZ造模后模型组大鼠的TC、TG及FFA均明显升高,与正常组相比有显著性差异(P<0.01)。罗格列酮干预组的TC、TG及FFA比模型组明显降低,但仍高于正常组。4肝脏病理变化:肉眼观正常对照组肝脏呈红褐色,质软,模型组及罗格列酮干预组均呈浅黄色或土黄色,触之油腻,切开时有油滴,较粗糙,易碎。HE染色观察肝细胞发生气球样变、点状坏死、脂肪变性。5肝脏PPARαmRNA及HNF4αmRNA表达水平的变化PPARαmRNA的表达在模型组表达减弱,低于对照组,有显著差异(P<0.01),罗格列酮组干预组高于模型组,差别有显著性(P<0.01)。模型组肝脏HNF4αmRNA表达水平较对照组降低,差别有显著性(P<0.01),罗格列酮干预组表达水平高于模型组,差别有显著性(P<0.05)。结论1高脂喂养8周可诱发大鼠胰岛素抵抗,该模型具有空腹血糖不高,高胰岛素血症、高血脂、胰岛素敏感性降低、肥胖的特点。2型糖尿病可并行脂肪性肝病,肝脏PPARαmRNA及HNF4αmRNA表达水平减弱,罗格列酮干预组表达有所恢复,说明二者可能参与2型糖尿病脂肪性肝病的发病过程,罗格列酮对2型糖尿病性脂肪性肝病有保护作用。