捻转补泻手法对SHR大鼠动脉血管ECM重构的逆转机制研究

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目的观察捻转补泻手法对自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertension Rat, SHR)血压(收缩压和舒张压)、血清中血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)浓度、腹主动脉中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)浓度及Ⅰ、Ⅲ型前胶原(PCⅠ、PC Ⅲ)、P38丝裂素活化蛋白激酶(P38Mitogen Activated Protein Kinases, P38/MAPK) mRNA表达的影响。从捻转补泻手法对P38/MAPK信号转导通路影响出发,研究针刺捻转补泻手法对高血压血管细胞外基质(extracellular matrix, ECM)重构的逆转机制与P38/MAPK信号转导通路的相关性及捻转补泻手法的效应差异。方法清洁级健康雄性11周龄WKY大鼠15只,SHR大鼠60只,体重240~280g。15只WKY大鼠作为正常对照组(A)。SHR大鼠按照随机数字表分为4组,每组15只,分别为模型对照组(B)、针刺对照组(C)、捻转补法组(D)、捻转泻法组(E)。五组大鼠适应性饲养一周后于每天上午八点开始实验操作,针刺对照组、捻转补法组、捻转泻法组SHR大鼠的两侧“太冲”穴分别施以针刺后不做手法、针刺捻转补法、针刺捻转泻法;模型对照组和正常对照组大鼠不针刺,只行与针刺对照组、捻转补法组、捻转泻法组相同的抓捉、捆绑刺激,捆绑时间为10min。两侧“太冲”穴隔日交替针刺,每连续针六天,停针一天,如此持续28天。捻转补法组、捻转泻法组捻转幅度为360°/次,频率为60次/min,持续捻转1min,留针9min。针刺对照组针刺后不做手法,留针10min。两侧“太冲”穴所有针刺操作均由同一人完成。在针刺治疗前一天,治疗第7、14、21、28天的下午四点开始测量各组大鼠尾动脉收缩压和舒张压。治疗28天后,对实验大鼠进行断头处死,取腹主动脉,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中AngⅡ含量、腹主动脉中MMP-9含量,用反转录PCR法(RT-PCR)检测腹主动脉中PCⅠ、PCⅢ、P38/MAPK的基因表达情况。结果1针刺捻转补泻对各组大鼠收缩压、舒张压的影响针刺治疗前SHR各组收缩压和舒张压均高于WKY正常对照组(P<0.05),但是SHR各组收缩压、舒张压组间比较,无明显差异(P>0.05)。针刺治疗28天后,各组血压治疗前后比较:A组治疗后舒张压与治疗前相比升高(P<0.05),收缩压治疗前后无明显差异(P>0.05);B组治疗后与治疗前相比,收缩压与舒张压均升高(P<0.05);C组和E组治疗后与治疗前相比,收缩压与舒张压均降低(P<0.05);D组治疗后收缩压较治疗前升高(P<0.05),舒张压治疗后较治疗前升高但无统计学意义(P>0.05)。针刺治疗28天后,各组血压组间比较:SHR各组收缩压与舒张压均高于WKY正常对照组(P<.05); E、C组与B组比较,收缩压和舒张压均降低(P<0.05)且E组血压降低幅度最大;D组与B组比较,收缩压和舒张压均无明显差异(P>0.05);E组与C组比较,收缩压和舒张压均降低(P<0.05);D组与C组比较,收缩压和舒张压均升高(P<0.05)。E组与D组比较,收缩压和舒张压均降低(P<0.05)。2针刺捻转补泻对各组大鼠血清中AngⅡ含量的影响B、C、D、E组与A组比较,AngⅡ含量均增高(P<0.05),差异有统计学意义;C、D、E组与B组比较,AngⅡ含量均降低(P<0.05),差异有统计学意义;D组与C组比较,AngⅡ含量升高,但无统计学意义(P>0.05);E组与C、D组比较,AngⅡ含量均降低(P<0.05),差异有统计学意义。3针刺捻转补泻对各组大鼠腹主动脉组织中MMP-9含量的影响B、C、D、E组与A组比较,MMP-9含量均增高(P<0.05),差异有统计学意义;C、D、E组与B组比较,MMP-9含量均降低(P<0.05),差异有统计学意义;D组与C组比较,MMP-9含量升高,但无统计学意义(P>0.05);E组与C、D组比较,MMP-9含量均降低(P<0.05),差异有统计学意义。4针刺捻转补泻对各组大鼠腹主动脉组织中PC Ⅰ、PCⅢ mRNA表达的影响对PC ⅠI mRNA表达的影响:B、C、D、E组与A组比较,PC Ⅰ mRNA表达均增高(P<0.05),差异有统计学意义;C、D、E组与B组比较,PC Ⅰ mRNA表达均降低(P<0.05),差异有统计学意义;C、D、E三组两两比较,PC Ⅰ mRNA表达均无明显差异(P>0.05)。对PC mRNA表达的影响:B、C、D、E组与A组比较,PC Ⅲ mRNA表达均增高(P<0.05),差异有统计学意义;C、D、E组与B组比较,PC Ⅲ mRNA表达均降低(P<0.05),差异有统计学意义;D组与C组比较,PC Ⅲ mRNA表达升高,但无统计学意义(P>0.05);E组与C、D组比较,PC Ⅰ mRNA表达均降低(P<0.05),差异有统计学意义。5针刺捻转补泻对各组大鼠腹主动脉组织中P38/MAPK mRNA表达的影响B、C、D、E组与A组比较,P38/MAPK mRNA表达均增高(P<0.05),差异有统计学意义;C、D、E组与B组比较,P38/MAPK mRNA表达均降低(P<0.05),差异有统计学意义;D组与C组比较,P38/MAPK mRNA表达升高,但无统计学意义(P>0.05);E组与C、D组比较,P38/MAPK mRNA表达均降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论1针刺后不做手法、捻转泻法均可有效降低SHR大鼠收缩压和舒张压,且以捻转泻法对血压降低最为明显。捻转补法有升高SHR大鼠收缩压的作用。2针刺后不做手法、捻转补法、捻转泻法均能同时降低自发性高血压大鼠血清AngⅡ浓度、腹主动脉组织MMP-9浓度及抑制腹主动脉组织PCⅠ、 PC Ⅲ、 P38/MAPK mRNA表达。除PC Ⅰ mRNA外,捻转泻法能最大程度地降低其它各指标浓度或抑制基因表达,优于针刺后不做手法与捻转补法;对于PC Ⅰ mRNA表达,针刺后不做手法、捻转补法、捻转泻法之间效应差异不明显。3针刺后不做手法、捻转泻法逆转自发性高血压大鼠动脉血管ECM重构的机制均可能与抑制P38/MAPK信号转导通路有关,捻转泻法的可能性最大。这一过程可能是通过降低AngⅡ的含量,抑制由AngⅡ介导的P38/MAPK信号转导通路,继而引起动脉组织中MMP-9浓度及PC Ⅰ、 PCⅢ mRNA表达的下降,起到预防动脉管壁胶原沉积、弹性蛋白分解过度的作用,最终逆转动脉血管ECM重构以实现降压效应。本实验中捻转补法表现为升压效应,与其他指标降低呈负相关,故捻转补法是否能够逆转高血压血管ECM重构还需今后进一步探讨。
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