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海苔,是亚洲百姓生活中比较常见的一种食品,也是日本传统饮食中较有代表性的健康食品。日本人的长寿和健康与他们日常大量摄取海藻类食品及其他海产品有着不可分割的关系,因此,从海苔中寻找功能性成分也成为了诸多科学研究者的研究课题。
作为海苔的原料来源,条斑紫菜(Porphyra yezoensis)所含的类菌胞素氨基酸(Mycosporine-Like Amino Acids,简称MAAs)是一类功能性氨基酸,它是一大类以环己烯酮为基本骨架,与不同类型氨基酸通过缩合作用所形成的水溶性物质,并广泛存在于多种水生生物中。目前国内外对于该类氨基酸的研究多集中于其紫外防护功能上,由于其吸收峰值在310-360nm之间,因此对紫外辐射具有较高的吸收能力,被认为具有保护细胞、减少UVR损伤的功能。但是,对于该类氨基酸的其他功能仅有少量文献有所报道。
本论文以日本海域中常见藻类为主要目标,测定类菌胞素氨基酸(MAAs)的分布情况,着重对条斑紫菜中所含有的Porphyra-334进行分析测定,并对其抗氧化、抗肿瘤细胞活性等新功能进行研究探索,同时尝试探讨其在海苔等健康食品中的保健功能机理。旨在为今后将该类功能性氨基酸开发成为天然、安全、有效的抗氧化产品、保健食品或者相关药物提供基础理论依据。
通过研究我们主要得到以下结论:
首先,本文发现条斑紫菜(Porphyrayezoensis)中含有较高浓度的Porphyra-334,并优化了提取Porphyra-334的HPLC条件:色谱柱:分析柱CAPCELL PAK C18 UGl 20 S-5(4.6mmi.d×150mm length)柱温:40℃
流动相:0.1%醋酸水溶液流速:0.7mL/min测定波长:330nm进样量:20μl分析时间:30min其次,我们发现条斑紫菜中提取的Porphyra-334对于AAPH诱导的亚油酸氧化反应以及单线态氧(1O2)诱导的亚油酸氧化反应具有较显著的抑制作用。同时,α-生育酚与Porphyra-334对由AAPH诱导的脂质氧化具有一定的协同抑制作用,在氧化反应开始10min时,50μM的Porphyra-334浓度条件下,添加与不添加0.02μMα-生育酚的抑制作用差异可达40%。
最后,从条斑紫菜中提取的Porphyra-334能够有效抑制B16-4A5鼠黑色素肿瘤细胞的生长,在Porphyra-334添加量为100μM时,经72h体外培养后,B16-4A5鼠黑色素肿瘤细胞的生存率与空白生存率(86.7%)相比,降低至45.4%左右。同时,在Porphyra-334添加量为100μM时,经72h体外培养后,正常人表皮角化细胞的生存率与空白生存率(98.1%)相比,降低至90.4%左右,可见Porphyra-334对于正常人表皮角化细胞’Keratinocyte的细胞增殖没有明显抑制。上述结论为Porphyra-334在临床应用方面提供了一定的理论依据,并揭示了将其开发成预防黑色素肿瘤细胞相关保健食品、化妆品或药物的可能性。