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背景 多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是育龄妇女最常见的内分泌疾患，其发生率占绝经前妇女的5％～10％，表现为雄激素过多(hyperandrogenism，HA)、慢性不排卵和多囊卵巢的全部综合病症。近年来，在PCOS的进一步研究中发现许多临床和实验现象单用性腺轴功能异常无法解释，如：1．大多数患者存在糖代谢异常，主要表现为胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)及高胰岛素血症(hyperinsulinemia，HI)，PCOS患者糖尿病的发生串较正常高7倍，发病时间也提前近30年；2．不同种族患者临床表现有差异，但IR表现却是共同的；3．青春期患者常先有IR及HI，后表现出雄激素过多及排卵障碍；4．单用LH或HCG能诱导动物多囊卵巢，但并不出现PCOS一系列的生化表现，加用胰岛素后则可诱导出典型的PCOS动物模型；5．用胰岛素增效剂可改善PCOS特征性的高雄激素血症及高黄体生成素血症，促进卵泡成熟、排卵及怀孕。基于这些现象，国内外学者对PCOS的本质及其发病机理逐步有了新的认识，越来越多的学者认为：IR及HI不仅是PCOS的另一重要生化特征，而且可能是PCOS发生的主要病理基础，在PCOS的发病中起着早期和中心的作用。 PCOS患者的胰岛素抵抗及高胰岛素血症会加重PCOS患者的雄激素过多、无排卵 浙江大学2003届颀士学位论文等生殖功能障碍，以及增加2 型糖尿病、高血脂、高血压、动脉粥样硬化、子宫内膜癌等远期并发症发生率。对其发生机制的研究，可分为三类：胰岛素受体前因素；受体缺陷；受体后因素。近年来，受体因素吸引了越来越多的关注，因为受体在整个胰岛素信号传导中起到了从细胞外过渡到细胞内的作用，它的自主磷酸化启动了胰岛素受体（insulin receptor，INSR）在细胞水平的作用，在 INS 的信号传导中发挥着重要作用。胰岛素与受体结合，实现了信号的跨膜传递。胰岛素受体是糖蛋白，有两个口亚基和两个B一亚基，通过二硫键相连，Q－亚基位于胞外，与胰岛素结合，p－亚基由胞外延伸到胞内，受体的自身磷酸化作用就发生在p－亚基，并由p亚基开始激活细胞内的一系列信号传导，因此，在受体后的信号传导中起关键作用的是受体的p－亚基，它的异常可能会引起胰岛素受体传导胰岛素信号异常，导致PCOS患者胰岛素抵抗的发生。 胰岛素受体p－亚基的损害，主要表现在两方面：Ins靶细胞膜上B－亚基数量减少和受体的功能——一自主磷酸化作用异常，主要是酪氨酸激酶活性异常。国外也曾有这方面的研究，结果发现与正常对照比较，PCOS 患者红细胞膜上胰岛素最大特异性结合明显下降，但是，研究并没有具体到6－亚基；另外有研究证实，胰岛素受体基因的多态性可以导致受体功能的改变，尤其是酪氢酸激酶片段基因的多态性，可直接影响酪氨酸激酶活性，使胰岛素受体p一亚基的自主磷酸化功能受损，从而导致之后一系列的信号传导异常。胰岛素受体基因蛋白激酶活性区有9 个绝对保守的氨基酸序列，这9 个位点及与此相邻的一些同源性保守序列在酪氢酸激酶活性的发挥中起关键作用，在17外显子里有3个这样的保守区，即－Tyr965一、－Tyr972一、和1003—1030的ATP结合区。它的多态性将对胰岛素受体D一亚基的自主磷酸化功能产生影响。国外曾有研究发现 PCOS患者中存在 17外显于多态性。遗憾的是国内目前为止，在心血管及内分泌已开始这方面的研究，但在PCOS患者中，对这个基因的研究还是空白。 本研究通过 Sestern Blot的方法，测定 PCOS患者红细胞膜上胰岛素受体 8一亚基的表达量，通过PCR－SSCP（单链构象多态性分析），检测PCOS患者胰岛素受体基因exon 17多态性，旨在从胰岛素受体p一亚基的表达量和其基因exon 二7多态性 二 浙江大学2003届硕士学位论文两方面结合，来解释PCOS患者易发生IR及HI的机制。同时，为筛选PCOS患者中易发生IR者奠定方法学的基础。材料和方珐 以2002年7月～2003年1月来本院不孕不育门诊就诊的PCOS患者为研究对象，其中又根据体重指数 BMI是否大于 25kg砌’分为 PCOS合并肥胖组和非肥胖组；根据空腹血糖／空腹血胰岛素是否小于1：3分为PCOS合并IR组和无IR组，对照为同期因单纯男性不育或管性不孕来本院不孕不育门诊就诊的，月经规则，基础内分泌正常，临床表现和B超均不提示PCOS的病人。取其静脉血，分离出红细胞和淋巴细胞。红细胞提取膜蛋白，采用 Western Blot的方法进行胰岛素受体 p一亚基的蛋白检测，对 Western Blot 结果进行半定量分析，淋巴细胞提取 DNA，进行胰岛素受体 exon17PCR扩增，PCR产物进行 SSCP分析，对检出的各种基因型进行 TA克隆和测序 在PCOS患者和对照之间，PCOS合并和不合并肥胖患者之间，及PCOS合并和不合并IR患者之间进行统计学分析，胰岛素受体p一亚基的表达量采用独立样本t检