第一章甲基纳曲酮抑制肝癌Hep G2细胞生物学行为目的:观察甲基纳曲酮对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移能力的影响方法:传代培养Hep G2人肝癌细胞于对数生长期,分别将含100μmol/L甲基纳曲酮(低剂量组)、1000μmol/L甲基纳曲酮(高剂量组)培养基与肝癌Hep G2细胞共孵24h、48h、72h,以等体积生理盐水处理组设立空白对照组。应用CCK8法观察甲基纳曲酮对细胞增殖能力的影响,transwell法观察甲基纳曲酮对Hep G2细胞迁移能力的影响。结果:CCK8实验不同剂量实验组及不同时间作用的OD值差异均有统计学意义(F组间=127.136,P组间=0.000),随时间条件的改变,相同剂量组的OD值均有变化的趋势(F时间=230.984,P时间=0.000),相同时间的不同剂量组之间亦有显著性差异(F剂量=18.15,P剂量=0.000),其中低浓度组和高浓度组无显著性差异(P=0.112);Transwell迁移实验显示高剂量组作用Hep G2细胞72h可显著降低Hep G2细胞的迁移性。结论:甲基纳曲酮对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移具有显著的抑制作用。第二章甲基纳曲酮抑制肝癌Hep G2细胞生长机制研究目的:初步探讨甲基纳曲酮对肝癌Hep G2细胞生物学功能影响的机制方法:人肝癌细胞Hep G2培养至生长对数期,将1000μmol/L甲基纳曲酮(高剂量组)培养基与肝癌Hep G2细胞共孵72h,以等体积生理盐水处理组设立空白对照组。应用荧光定量PCR法观察甲基纳曲酮对人肝癌细胞Hep G2的VEGF、MMP-9在m RNA水平上的影响,用Western Blot法观察甲基纳曲酮对人肝癌细胞Hep G2的VEGF、MMP-9在蛋白水平上的影响。结果:高浓度的甲基纳曲酮作用72h后,对照组人肝癌细胞Hep G2的VEGF的m RNA的相对表达量为1.00±0.03,高于实验组0.38±0.09(t=9.35,P=0.003),差异结果有统计学意义(P<0.05);对照组MMP-9的m RNA的相对表达量为0.96±0.17高于实验组的0.75±0.22(t=1.243,P=0.000),差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,高浓度甲基纳曲酮作用于肝癌Hep G2细胞72h后,VEGF、MMP-9的蛋白表达量较对照组有所下调,具有统计学意义(P<0.05)。结论:甲基纳曲酮对肝癌Hep G2细胞生物学功能影响的机制可能与甲基纳曲酮可下调肝癌Hep G2细胞的VEGF、MMP-9在m RNA、蛋白水平上的表达有关。第三章甲基纳曲酮对裸鼠移植瘤的生长抑制目的:建立裸鼠移植瘤模型并进一步探讨甲基纳曲酮在体内对Hep G2人肝癌细胞的裸鼠移植瘤的成瘤能力的影响。方法:消化收集对数期生长的人肝癌Hep G2细胞,调整细胞个数为1*107个,总共200ul。将以上制备好用于接种裸小鼠的Hep G2各组细胞悬液,于裸小鼠腋下注射入Hep G2细胞悬液制成动物实体瘤模型。实验分为对照组、单纯甲基纳曲酮用药组,单纯甲基纳曲酮用药组第8天开始药物干预,对照组以同样方法每天给予等量生理盐水。正常喂养29天。观察裸鼠成瘤情况,于第30天尽可能完整无缺地剥离裸鼠的瘤组织并记下所称量的重量,记下各瘤组织的重量,拍照。成瘤率=(成瘤裸鼠数/试验组裸鼠数)×100%。结果:实验结果表明,甲基纳曲酮组裸鼠一般情况好于对照组,不良表型好于对照组。营养状况甲基纳曲酮组好于对照组,实验组体重显著大于对照组(t=2.49,P=0.032);用药结束后,甲基纳曲酮组净瘤质量明显小于对照组(t=5.45,P=0.000)。结论:在体内实验中,甲基纳曲酮具有抑制Hep G2人肝癌细胞移植瘤的成瘤,抑制率为59.23%,这和体外实验结果相一致。