背景:Klotho是一种抗衰老蛋白,还具有抗炎、抗肿瘤和抗氧化等功能。本实验室前期已证明Klotho可以通过抑制NF-κB的活性和氧化应激,抑制炎性介质的释放而调控巨噬细胞的浸润。NLRP3炎症小体作为NF-κB信号通路的下游蛋白,被认为是炎症反应的核心,异常激活时可以导致炎症反应的发生。研究证实Klotho可以有效地抑制疾病的炎症反应,但其抗炎作用机制是否与NLRP3炎症小体相关,目前尚无确切的报道。目的:旨在研究Klotho对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞炎症反应的影响,并探究其抗炎机制是否与NLRP3小体相关。方法:1.将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞复苏后,分成正常组和药物组,选择Klotho作为研究对象,浓度分别为（200、400、600、800 pm/L）,培养24h后,采用MTT实验判断Klotho对RAW264.7细胞活力的影响。将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分为正常组（Normal）、LPS 组以及 LPS+Klotho（400 pm/L）组。随后,LPS（1μg/mL）诱导 RAW264.7细胞,建立起细胞炎性模型并给予药物处理。2.将 RAW264.7 细胞用 Klotho（400 pm/L）与 LPS 共同培养 12 h 后,RT-PCR 法检测 ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18 mRNA 的表达水平。3.将 RAW264.7 细胞用 Klotho（400 pm/L）和 LPS 共同培养 24 h 后,Western blot 检测细胞内 Phospho-NF-κB-p65、COX-2、ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18 的蛋白表达水平。4.将RAW264.7细胞用Klotho（400 pm/L）和LPS共同培养24 h后,收集细胞上清液,并用ELISA检测上清液中IL-1β、IL-18的含量。结果:1.MTT实验结果显示,Klotho浓度在200 pm/L-800 pm/L之间对RAW264.7细胞的生长和存活不产生影响,且在400 pm/L时细胞存活率最高,因此实验选用400 pm/L处理小鼠巨噬细胞。2.RT-PCR实验结果显示,与Normal组相比,经LPS处理后的RAW264.7细胞内ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α、IL-1β,IL-18 mRNA 的表达上调（P＜0.05）;与 LPS 组相比,LPS+Klotho 组中 ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α、IL-1β、IL-18 mRNA 表达则降低（P＜0.05）。3.Western blot实验结果显示,与LPS组相比,LPS+Klotho组中COX-2的表达量降低,而且明显抑制了细胞内NF-κB-p65的磷酸化水平。此外,与Normal组相比,LPS组中ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α及细胞因子IL-1β、IL-18的蛋白表达量增加;与LPS组相比,LPS+Klotho 组降低了 ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α及细胞因子 IL-1β、IL-18 的蛋白表达水平。4.ELISA实验结果显示,与LPS组相比,LPS+Klotho组细胞培养上清液中促炎性因子IL-1β、IL-18的表达量下调。结论:Klotho在LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症反应中发挥了抗炎作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化有关。