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背景慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征（CP/CPPS）是一种常见的泌尿系统疾病,严重影响了患者健康及生活质量。主要特点是疼痛和下尿路刺激症状,疼痛部位可涉及到患者的骨盆、会阴、阴囊、直肠、睾丸、阴茎和后背。CP/CPPS的病因尚不明确,慢性炎症作为CP/CPPS的病因已被深入研究。大量证据表明,CP/CPPS疾病可能是由针对前列腺抗原（PAg）的自身免疫攻击导致的炎症所致。基于对CP/CPPS患者和动物模型研究的大量证据表明:CP/CPPS患者的自身免疫功能失调,T细胞免疫失衡和巨噬细胞表型转换,在CP/CPPS的发生发展中发挥着重要作用。致病因素以前列腺自身免疫的形式触发慢性炎症,促进T细胞和不同的其他白细胞（包括巨噬细胞）向前列腺部位募集,导致前列腺组织炎症和慢性盆腔疼痛。局部炎性微环境的改变和炎症介质的分泌可能诱发神经敏感化,导致慢性盆腔疼痛的发生。尽管炎性免疫细胞构成的变化及在CP/CPPS中的致病作用已被发现,但迫切需要更多的研究来确定影响炎性免疫细胞构成的因素及机制。趋化因子CXCL10及其受体CXCR3可参与调节免疫和炎症反应,然而趋化因子CXCL10及其受体CXCR3在CP/CPPS疾病中的作用尚不清楚。本课题在建立实验性自身免疫性前列腺炎（EAP）模型的基础上,研究了趋化因子CXCL10及其受体CXCR3在CP/CPPS疾病中的作用,及其对巨噬细胞趋化、巨噬细胞极化、Th1细胞分化的作用与机制。方法一、CP/CPPS患者及EAP模型中趋化因子CXCL10检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测CP/CPPS患者及健康志愿者血清中CXCL10的变化。通过两次免疫造模法成功构建EAP模型,采用实时定量聚合酶链式反应（RT‐q PCR）、免疫组织化学染色（IHC）和ELISA实验检测EAP模型血清或前列腺组织中CXCL10的变化。二、良性前列腺增生患者的前列腺组织及EAP模型中CXCR3检测根据组织炎症程度,对获取的良性前列腺增生患者的前列腺组织进行炎症程度分组,采用IHC检测CXCR3的表达变化。采用RT‐q PCR、IHC检测EAP模型前列腺组织中CXCR3的变化。三、EAP模型前列腺组织中CXCL10细胞来源分析采用免疫荧光染色（IF）检测EAP模型前列腺组织中CXCL10的细胞来源定位。四、前列腺基质细胞活化后合成及分泌CXCL10增加在体外,采用细胞因子IFN‐γ和IL‐17A刺激前列腺基质细胞,模拟EAP模型前列腺组织微环境,采用RT‐q PCR、ELISA检测CXCL10变化。五、趋化因子CXCL10及其受体CXCR3在体内对EAP小鼠前列腺组织的炎症程度和盆腔疼痛的影响采用腺相关病毒敲减CXCL10及使用CXCR3拮抗剂（AMG487）处理EAP小鼠模型,采用H＆E染色检测前列腺组织炎症程度,行为学评估小鼠对疼痛刺激的反应性,ELISA检测炎性细胞因子的变化。六、趋化因子CXCL10及其受体CXCR3在体内可促进巨噬细胞迁移至前列腺部位采用腺相关病毒敲减CXCL10及使用CXCR3拮抗剂（AMG487）处理EAP小鼠模型,采用流式细胞术及IF检测前列腺组织中巨噬细胞数量变化。七、趋化因子CXCL10及其受体CXCR3在体外可促进巨噬细胞趋化采用Transwell小室及μ‐Slide检测CXCL10重组蛋白及AMG487对巨噬细胞迁移的影响,采用蛋白印迹（WB）方法检测Erk1/2或p38 MAPK的磷酸化水平变化。八、趋化因子CXCL10及其受体CXCR3在体外对巨噬细胞活力无影响采用CCK8实验检测CXCL10重组蛋白及AMG487对巨噬细胞活力的影响。九、趋化因子受体CXCR3在体内对巨噬细胞极化的影响使用CXCR3拮抗剂（AMG487）处理EAP小鼠模型,采用IF检测前列腺组织中M1型巨噬细胞的变化。十、趋化因子受体CXCR3在体外对巨噬细胞极化的影响采用IF检测AMG487对M1型巨噬细胞极化的影响,采用WB检测Erk1/2、p38 MAPK、NF‐κB的磷酸化水平变化。十一、趋化因子受体CXCR3在体内对Th1细胞分化的影响采用IF及流式细胞术检测EAP模型前列腺组织或脾脏中Th1细胞比例的变化。十二、趋化因子受体CXCR3在体外对Th1细胞分化的影响采用流式细胞术检测Th1细胞比例的变化,采用WB检测STAT4的磷酸化水平变化。结果一、CXCL10在CP/CPPS患者血清中表达升高,且与疾病严重程度呈正相关。CXCL10在EAP模型的血清及前列腺组织中表达升高。二、CXCR3在组织性前列腺炎症患者的前列腺组织中高表达,且及炎性细胞浸润程度呈正相关。CXCR3在EAP模型的前列腺组织中表达升高。三、CXCL10与巨噬细胞、CD4+T细胞、前列腺基质细胞存在共定位。与正常组小鼠相比,EAP小鼠模型前列腺组织中的CD4+T细胞、巨噬细胞和前列腺基质细胞中CXCL10的荧光强度更高。四、IFN‐γ、IFN‐γ＆IL‐17A刺激前列腺基质细胞,可明显诱导前列腺基质细胞分泌CXCL10,但是IL‐17A单独刺激无法诱导CXCL10的分泌。五、敲减CXCL10及抑制CXCR3活性后,可改善EAP小鼠前列腺组织的炎症程度和盆腔疼痛,减少EAP小鼠促炎细胞因子IL‐6和MCP1的表达。六、CXCL10/CXCR3轴在体内及体外可促进巨噬细胞的迁移。CXCL10/CXCR3轴通过活化Erk1/2和p38 MAPK下游信号通路,促进巨噬细胞的迁移。可抑制LPS/NF‐κB p65、p38 MAPK及ERK1/2信号通路,抑制M1型巨噬细胞极化。可抑制IL‐12/STAT4通路抑制Th1细胞分化。结论在CP/CPPS疾病及EAP模型中,趋化因子CXCL10及其受体CXCR3是慢性前列腺炎发生发展的重要介质,参与前列腺组织的炎症浸润和疼痛症状。趋化因子CXCL10通过CXCR3介导的ERK1/2和p38 MAPK激活促进巨噬细胞迁移,并促进巨噬细胞向M1型极化,此外可通过活化IL12‐STAT4通路,促进Th1细胞分化,分泌炎症介质导致EAP疾病进展。