益髓灸对D-半乳糖衰老小鼠抗氧化能力的影响

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目的:本课题应用D-半乳糖衰老小鼠模型,观察益髓灸处方对D-半乳糖衰老小鼠血清、脑组织的8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)、总抗氧化能力(T-AOC)、klotho蛋白的影响,比较足三里配悬钟、百会配关元两组穴位处方抗氧化延缓脑衰老效应,探讨其作用机制,为临床综合防治脑衰老提供实验依据。  方法:SPF级3月龄雄性昆明小鼠体重30±2g(由广西医科大学动物实验中心提供)60只,分组前先做动物水迷宫检测,后随机分为4组,生理盐水组(简称生理组)、造模组、艾炷灸足三里+悬钟穴组(简称艾灸1组)、艾炷灸百会+关元穴组(简称艾灸2组),每组15只。造模组和各艾炷灸治疗组以D-半乳糖按1000mg/kg/d颈背部皮下注射,连续56天,同时生理组颈背部皮下注射等量的生理盐水56天。造模第13天两组艾灸治疗组开始艾灸,每次每穴三壮,灸单侧(或两穴),共6壮。生理盐水组及造模组不做任何治疗性干预,但给予与各治疗组同样时间、同样程度的刺激。造模、治疗结束后,眼球取血,断头取脑,制备脑组织匀浆,用酶联免疫法(ELISA)检测血清及脑组织8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)、总抗氧化能力(T-AOC)、klotho蛋白水平。  结果  (1)四组血清、脑组织中8-OHdG水平有显著性差异(P<0.01),两两比较提示,模型组明显高于生理组、艾灸1组和艾灸2组,差异有显著性意义(P<0.01),其余3组,组间无显著性差异;  (2)四组血清、脑组织中T-AOC含量有显著性差异(P<0.01),两两比较提示,造模组明显低于生理组、艾灸1组和艾灸2组,差异有显著性意义(P<0.01),其余3组,组间无显著性差异;  (3)四组血清Klotho蛋白含量有显著性差异(P<0.01),两两比较提示,造模组含量明显低于生理组、艾灸1组和艾灸2组,差异有显著性意义(P<0.01),其余3组,组间无显著性差异;四组脑组织中β-Klotho蛋白含量有显著性差异(P<0.01),两两比较提示,造模组含量明显低于生理组、艾灸1组和艾灸2组,差异有显著性意义(P<0.01),其余3组,组间无显著性差异。  结论:  (1)本课题在颈背部以1000mg/kg/d的剂量注射D-半乳糖56天成功复制了氧化应激脑衰老动物模型。  (2)益髓灸处方“足三里+悬钟”和“百会+关元”均能有效抑制D-半乳糖脑衰老模型小鼠的细胞DNA损伤,提高脑衰老模型小鼠的抗氧化能力。  (3)益髓灸防治脑衰老的作用机制可能是通过降低D-半乳糖诱导的8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)表达,抑制细胞的DNA损伤,增加机体总抗氧化能力(T-AOC)、klotho蛋白的活性,发挥抗氧化应激损伤的作用。  
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