布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌侵入机体而引起的慢性细菌性人畜共患病。布鲁氏菌可感染人类、多种家畜和野生动物，严重影响着畜牧业的发展和公共卫生安全。因此，针对该病研发出快速、有效的诊断方法是非常必要的。目前，针对该病的诊断国内外学者相继建立了许多方法，虽然有些方法颇有成效，但存在着价格高、操作繁琐、专业性强等缺点而不适合基层布病的准确诊断。因此，建立一种廉价、敏感性高、特异性好、操作方便、适用于基层布病快速诊断的方法迫在眉睫。本研究基于布鲁氏菌表面蛋白以胶体金为标记材料建立了一种布鲁氏菌病快速诊断方法，为基层布病准确、快速、简便的大量初步筛查提供技术支持。莱姆病是一种由蜱传播疏螺旋体而引起的人畜共患病，该病能引起人和动物的多个组织器官的损伤。感染伯氏疏螺旋体的人和动物大多经历莱姆病的多个时期，且各个时期呈现不同的临床症状，极容易与其它疾病混淆，严重的危害着公共卫生安全。目前，国内对该病在诊断方面的研究甚少。基于伯氏疏螺旋体外膜蛋白抗原具有一定的免疫原性的特点，本研究通过原核表达的方法获得莱姆病螺旋体抗原蛋白，并对其血清学检测方法进行了初步研究。目的：建立一种新的布鲁氏菌病及莱姆病螺旋体胶体金免疫层析检测方法。本文对布鲁氏菌病和莱姆病两个新疆高发的人兽共患病主要研究成果报告如下：1.布鲁氏菌表面蛋白的纯化及验证：使用亲和层析的方法对实验室保存的布鲁氏菌表面蛋白BP26、VirB5、SP41及OMP31进行纯化，通过WB试验和ELISA试验验证四个表面蛋白的反应原性和免疫原性。结果显示：获得了高纯度的重组蛋白，且四个融合蛋白均具有良好的免疫原性和反应原性，为后续布鲁氏菌病免疫层析试纸条的制备奠定了坚实的基础。2.布鲁氏菌病免疫层析检测试纸条的制备：以纯化的布鲁氏菌表面蛋白BP26、VirB5、SP41及OMP31为检测抗原，利用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制备胶体金免疫层析试纸条，对反应的各个条件进行了优化，最终使用布病VirB5蛋白制备出胶体金免疫层析试纸条。用琥红平板凝集试验、试管凝集试验及制备的免疫层析试纸条分别对166份绵羊血清样本进行检测：阳性率分别为34.3％(57/166)、36.7%(61/166)、和36.1％（60/166），RBPT检出的57份阳性均能被试纸条检出，与试管凝集符合率为98.4%。整个检测过程在10min内便可完成；制备的免疫层析试纸条具有准确性高、敏感性好、操作简便的特点。3.莱姆病伯氏疏螺旋体外膜蛋白OspA和BmpA的原核表达、纯化及验证：构建莱姆病伯氏疏螺旋体OspA和BmpA原核表达系统，使用亲和层析对蛋白OspA和BmpA进行纯化，通过WB验证蛋白的反应原性。结果显示：获得了高纯度的重组蛋白，且融合蛋白均具有良好的反应原性，为进一步制备莱姆病免疫层析试纸条奠定基础。4.莱姆病螺旋体快速诊断试纸条的制备：胶体金制备的方法、胶体金颗粒的质量鉴定及抗原标记条件均同布鲁氏菌病免疫层析试纸条制备一致，以莱姆病外膜蛋白OspA和BmpA分别作为检测抗原，制备胶体金免疫层析试纸条并对其特异性、敏感性等作出评价。结果显示：试纸条最高可检出兔莱姆病标准阳性血清为1:200。20份疑似莱姆病的绵羊血清样本中共检出2份阳性，与标准法westernblot检测的符合率为100%。整个检测过程在10min内便可完成；本试纸条在4℃冰箱中可保存半年以上。结论:成功表达、纯化了布鲁氏菌的四个表面蛋白并首次以表面蛋白VirB5为诊断抗原制备出胶体金免疫层析试纸条；构建了莱姆病OspA、BmpA基因的原核表达系统，并在国内首次以OspA、BmpA为检测抗原，制备胶体金试纸条。