脂溶性化感物质生物检测方法学研究及黄檗果皮化感物质的初步研究

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本论文结合药剂学知识,将细胞实验和动物实验中使用的增溶剂和助悬剂,用于脂溶性化感物质的生物检测。利用增溶剂和助悬剂能够增大脂溶性化感物质在水中的溶解性的功能,使脂溶性化感物质的生物检测过程更安全、准确。通过对吐温-80(Tween-80)、吐温-60(Tween60)、吐温-40(Tween40)、吐温-20(Tween20)、泊洛沙姆188(F-68)、卖泽52(S-40)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)在植物种子萌发及幼苗生长实验中使用的安全性和适用浓度进行试验和评价得知,吐温-80(Tween-80)、吐温-60(Tween-60)、吐温-40(Tween-40)、泊洛沙姆188(F-68)、卖泽52(S-40)的安全性较高,而吐温-20(Tween20)和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)对受体种子萌发和幼苗生长的影响较大。安全浓度范围分别为,吐温-80(Tween-80)约14~1000mg/L,吐温-60(Tween-60)约28~5000mg/L,吐温-40(Tween-40)约31~1000mg/L;泊洛沙姆188(F-68)约0.2~4.0%;卖泽52(S-40)约0.5%。通过考察泊洛沙姆188(F-68)、吐温-80(Tween-80)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)增溶或助悬香草醛和阿魏酸对受体种子进行化感生物检测得知,脂溶性化感物质用泊洛沙姆188(F-68)、吐温-80(Tween-80)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)增溶或助悬后,形成的溶液是一个稳定的体系,试验过程中浓度不发生变化,可准确定量考察化感物质的活性强度。综上所述,就安全性而言,吐温-80(Tween-80)、吐温-60(Tween-60)、吐温-40(Tween-40)、泊洛沙姆188(F-68)、卖泽52(S-40)的安全性较高;就增溶或助悬效果而言,吐温-80(Tween-80)、吐温-40(Tween-40)、泊洛沙姆188(F-68)、卖泽52(S-40)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的增溶或助悬效果较好。最后评价出泊洛沙姆188(F-68)的综合效果最好。通过对黄檗果皮化感物质进行分离提取和化感活性检测得知,黄檗果皮挥发油的化感抑制作用不显著,黄檗果皮90%乙醇粗提物的化感抑制作用极为显著。90%乙醇粗提物硅藻土拌样后,用正己烷、氯仿、丙酮、95%乙醇、50%乙醇依次洗脱,经化感活性检测得知,黄檗果皮90%乙醇提取物的95%乙醇组分中含有化感活性物质,化感活性生物检测显示,该组分在相当于每mL含果皮10~125mg时,对供试种子的发芽势和发芽率产生极显著的抑制作用,对苗高、根长、根重、地上部重也有极显著的抑制作用,且随着浓度的增加,抑制强度增强,在高浓度时能够完全抑制种子萌发和幼苗生长。对95%乙醇组分进行硅胶柱色谱分离,并进行化感活性追踪。在高极性部分分离到大量单体化合物α—D—葡萄糖及具有化感抑制作用的组分,采用高效液相色谱法(HPLC-ELSD),测定95%乙醇组分浸膏中α—D—葡萄糖的含量约31.8%。在生物检测中发现,由于α—D—葡萄糖的存在,受体种子发芽所需时间延长,同时由于有此优质碳源的存在,引发大量霉菌生长,进一步对种子的萌发过程产生影响。这种现象与前期研究中发现的在黄檗果实果皮腐烂释放种子的过程中,有大量种子腐烂失活的现象相吻合。
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