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医学和兽医临床细菌耐药性逐年上升，多重耐药及泛耐药现象严重。但新药研发进展缓慢，且花费巨大，因而对早期尤其是不常引起耐药性的抗生素的重新应用可能成为治疗耐药菌引起感染的有效选择。医学临床使用磷霉素有效地治疗由大肠杆菌等多种病原菌引起的非复杂性泌尿道感染成为其中的成功典例。磷霉素在我国应用于临床已多年，但关于其耐药机制及特点的报道却非常少。本论文初步研究了自宠物和食品动物分离的大肠杆菌中磷霉素耐药基因fosA3的流行状况和传播机制，为预防和减少磷霉素耐药性的出现提供依据，并为解决兽医临床耐药性传播问题提供新思路。 本研究对2002～2010年分离自广东地区的1215株不同来源的大肠杆菌(323株来自宠物，892株来自食品动物)采用PCR方法检测磷霉素耐药基因fosA3、fosC2和fosA，其中29株宠物源大肠杆菌和10株食品动物源大肠杆菌为fosA3阳性，检出率分别为9.0％和1.1%。所有菌株都未检测到fos C2和fosA基因，说明广东地区宠物源和食品动物源大肠杆菌主要流行的磷霉素耐药基因型是fosA3。 采用琼脂稀释法测定39株fosA3阳性菌对磷霉素、头孢噻肟、阿米卡星、庆大霉素、四环素、氯霉素和环丙沙星的敏感性，结果显示39株fosA3阳性菌，全部为多重耐药菌株，对磷霉素的MIC值均大于或等于256μg/mL，对上述5类药物耐药情况严重，耐药率均达70%以上。采用PCR方法检测fosA3阳性菌中16S rRNA甲基化酶和β-内酰胺酶基因的携带情况，发现所有阳性菌均携带blaCTX-M基因，有29株菌携带rmtB或armA基因。 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、大肠杆菌系统进化分群和多位点序列分型(MLST)方法研究fosA3阳性菌株的克隆关系。大肠杆菌系统进化分群结果表明超过半数的fosA3阳性菌株属于系统进化组群的A组(53.8%)，其次是D组(28.2%)和B1组(17.9％)，未检测到B2组。PFGE分型结果表明，fosA3阳性菌之间的亲缘关系具有较大差异，但2008～2010年分离自不同医院犬和猫的同属B1组的三株菌具克隆相关性，通过MLST方法发现三株菌ST分型相同，提示犬和猫之间存在fosA3阳性菌克隆传播现象。 采用接合实验、化学转化、质粒复制子分型、质粒限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)和Southern杂交等方法研究fosA3的水平传播和阳性质粒特征。通过接合转移和化学转化试验证明了fosA3的可转移性，且大部分blaCTX-M(31/39)和rmtB(20/39)能随fosA3一同转移到受体菌中。fosA3主要位于F33：A-：B-(15株)和F2：A-：B-(11株)型质粒上。所有的F33：A-：B-型质粒都同时携带rmtB和blaCTX-M-65基因，并发现其EcoRI酶切条带相同或相似。对12株宠物源F33：A-：B-型质粒的EcoRI酶切条带进行Southern杂交，结果发现其中有9株菌fosA3基因杂交的位置一样，说明fosA3基因位于相似的F33：A-：B-型质粒上。对39株fosA3阳性菌进行质粒沉溺系统的PCR检测，发现最常见的沉溺系统是PemKI、Hosk-Sok和SrnBC，几乎所有的F33：A-：B-质粒都同时携带这三种系统。 采用PCR方法对fosA3上下游环境序列进行分析，发现所有的fosA3基因两侧都被插入序列IS26包围，这与日本首次报道的fosA3基因环境相似。所有的fosA3基因都位于距IS26序列下游的316bp处，但fosA3的3’末端到IS26序列的间区长度多样(536bp，1758bp，1643bp，370bp不等)，且长1758bp的间区序列与肺炎克雷伯氏菌342的染色体序列有79%的同源性。 综上所述，fosA3常携同blaCTX-M和rmtB基因共同传播，主要是通过F33：A-：B-和F2：A-：B-型质粒进行水平转移。动物源细菌的耐药基因可以通过直接与人体的接触或是通过食物链间接地向人体进行传递，宠物和食品动物携带的磷霉素耐药基因很可能成为公共卫生问题。我国应加强动物抗生素使用管理制度的建设。