骨化三醇对重度慢性牙周炎患者龈下菌斑厌氧菌群的影响

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目的:维生素D与牙周健康密切相关。本研究目的是观察生物活性形式维生素D骨化三醇(1,25-(OH)2D3,1,25D)对体外培养慢性重度牙周炎患者厌氧菌群构成、种类和数量的直接作用,为1,25D在牙周炎发生发展中的作用机制及临床应用的研究提供科学数据。  方法:随机选取来自中国医科大学附属口腔医院牙周科就诊的重度慢性牙周炎患者17例。采用纸尖法收集患者的龈下菌斑。体外将同一重度慢性牙周炎患者来源龈下菌斑分别接种在含有0.05%无水乙醇(对照组)、10-10mol/L1,25D、10-8mol/L1,25D的BHI固体培养基上,厌氧环境下培养72 h,收集培养后厌氧菌群。  实验一:提取3例厌氧菌群总DNA,以每组10 ngDNA为上样量,通过Illumina Misep测序平台16S rRNA基因高通量测序定性分析不同浓度1,25D对重度慢性牙周炎患者龈下菌斑中厌氧菌属构成的影响。  实验二:初步观察14例厌氧菌落形态,记录其大小、形状、颜色、边缘、光滑度、透明度及是否溶血,将培养菌落分类、计数、测序,分析1,25D对重度慢性牙周炎患者龈下菌斑中厌氧菌群各菌种数量的影响。  结果:实验一:高通量测序共检测出18个属,主要包括放线菌属、弯曲杆菌属、孪生球菌属,艾肯菌属、奈瑟菌属、链球菌属和韦永氏球菌属等。三组间厌氧菌群的菌群多样性改变无明显差异(P>0.05)。和对照组相比,10-8mol/L1,25D组中链球菌属、艾肯菌属、小杆菌属、伴放线菌属构成比下降(P<0.05);而弯曲杆菌属、抗口臭致病菌属、嗜血杆菌属的构成比升高(P<0.05),其余菌属构成比无明显改变。和对照组相比,10-10mol/L1,25D组艾肯菌属、伴放线菌属的构成比明显下降,其余菌属构成比无明显差异。实验二:菌落计数、测序共发现13种细菌,和对照组相比,10-10mol/L1,25D组(P<0.05)、10-8mol/L1,25D组(P<0.01)组总菌落数量降低。10-8mol/L1,25D可降低口腔链球菌、轻链球菌、星座链球菌、中间链球菌、放线菌otis、戈氏放线菌、牙龈卟啉单胞菌、小韦荣菌、具核梭杆菌的菌落数量(P<0.05);10-10mol/L1,25D可降低放线菌otis、戈氏放线菌、具核梭杆菌的菌落数量。其余菌落与对照组比较无明显统计学差异(P>0.05)。  结论:牙周炎患者龈下菌斑中的厌氧菌群具有多样性,1,25D可显著抑制龈下菌斑中厌氧菌的生长,并改变龈下菌斑中厌氧菌群的群落构成,可能作为人体内的抑菌物质直接参与控制牙周感染。
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