【摘 要】
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猪肉是我国主要的肉类产品,随着国民生活水平的提高,老百姓对猪肉的需求量不断增长,因此提高猪肉产量对国民生活有着重要意义。猪肉按其结构和功能的差异,可以分为骨骼肌、平滑肌和心肌,其中骨骼肌是其最主要构成类型。因此,研究骨骼肌的发育调控过程有助于提高猪肉产量。猪骨骼肌的发育按肌纤维形成的过程大致分为两个阶段:在妊娠35天左右形成初级纤维,这个过程将一直持续到妊娠第60天;在妊娠50-60天时开始形成次
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猪肉是我国主要的肉类产品,随着国民生活水平的提高,老百姓对猪肉的需求量不断增长,因此提高猪肉产量对国民生活有着重要意义。猪肉按其结构和功能的差异,可以分为骨骼肌、平滑肌和心肌,其中骨骼肌是其最主要构成类型。因此,研究骨骼肌的发育调控过程有助于提高猪肉产量。猪骨骼肌的发育按肌纤维形成的过程大致分为两个阶段:在妊娠35天左右形成初级纤维,这个过程将一直持续到妊娠第60天;在妊娠50-60天时开始形成次级纤维,这一过程在约75天达到增殖高峰;此后在到达妊娠第90天时肌纤维数量不再变化。前人的研究表明,组蛋白H3K27me3参与了骨骼肌发育过程的调控,但其作用机制,尤其在猪骨骼肌中的作用机制尚不清楚。因此,本研究采集了杜洛克猪胚胎33天、65天和90天的背最长肌,通过Western Blotting检测H3K27me3在三个时期背最长肌的表达水平,并通过Ch IP-seq检测了H3K27me3在三个时期背最长肌全基因组的修饰水平,并进一步通过RNA-seq检测了3个时期背最长肌的转录情况,将Ch IP-seq与RNA-seq联合分析,筛选出在初级纤维和次级纤维形成过程中受组蛋白H3K27me3修饰的关键基因。具体结果如下:(1)Western Blotting检测表明,胚胎33天、胚胎65天和胚胎90天的背最长肌中均有H3K27me3修饰,其中,胚胎33天背最长肌的H3K27me3修饰低于胚胎65天,而胚胎65天背最长肌的H3K27me3修饰低于胚胎90天,表明初级纤维和次级纤维形成过程中,H3K27me3可能发挥重要作用。(2)RNA-seq结果表明,在胚胎33天、胚胎65天和胚胎90天的背最长肌中存在显著差异表达的基因共有540个;而结合Ch IP-seq和RNA-seq进行分析,发现三个时期中受H3K27me3修饰的差异基因数为329个,包括PI3K/Akt信号通路和MAPK信号通路上的基因。(3)结合已有文献报道,从PI3K/Akt信号通路和MAPK信号通路中筛选出了MAP3K14、RASGRP1、ITGB6三个候选基因进一步深入研究。RT-q PCR结果表明,MAP3K14、RASGRP1、ITGB6的基因表达量在初级纤维和次级纤维形成过程中显著增加。Ch IP-q PCR验证结果表明,RASGRP1、ITGB6在胚胎90天骨骼肌中的富集量低于胚胎65天,且在胚胎65天骨骼肌中的富集量低于胚胎33天;而MAP3K14在胚胎90天骨骼肌中的富集量低于胚胎65天,但高于胚胎33天。本研究结果为H3K27me3对猪骨骼肌发育机制进行了初步研究,为研究骨骼肌发育提供新的研究思路和候选基因。
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