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第一部分:臭牡丹含药血清对人肝癌MHCC97-H细胞的抑制作用及其机制研究目的:从PI3K/Akt信号通路角度探讨臭牡丹含药血清对肝癌MHCC97-H细胞的影响及可能的机制。方法:臭牡丹15%含药血清作用于MHCC97-H细胞,显微镜下观察细胞形态的变化;CCK8法观察臭牡丹含药血清对细胞增殖的影响,以筛选最佳作用时间和浓度;AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;细胞划痕实验定性观察臭牡丹含药血清对MHCC97H细胞迁移能力的影响;Transwell实验定量检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blot法检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对PI3K/Akt信号通路中关键蛋白中PTEN、p-Akt、PI3K和Akt相关蛋白表达的影响;RT-PCR检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对NF-κB、IL-2和TNF-αmRNA表达的影响。结果:1.CCK8结果显示,臭牡丹含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。其中高剂量组抑制作用最为明显,在24 h、48 h和72 h的最大抑制率分别达到28%、32%、43%;2.流式细胞术结果显示,随含药血清浓度的增加,细胞的生长均受不同程度抑制,细胞的凋亡比例亦相应增加,72 h干预组抑制作用明显（P<0.01）,臭牡丹含药血清组各时间段最大凋亡率达19.48%、19.72%,与空白组比较,差异显著（P<0.05）;3.随含药血清浓度的增加,细胞G2/M期细胞比例亦相应增加,S期细胞比例降低,中、高剂量组与对照组比较,差异显著（P<0.05）;4.划痕实验结果显示经臭牡丹含药血清干预后,MHCC97-H细胞迁移能力下降;5.Transwell实验结果显示臭牡丹含药血清明显减少了穿膜细胞数目（P<0.01）;6.Western blot法结果显示不同浓度臭牡丹含药血清干预下各组PTEN表达量均不同程度升高（P<0.05）,PI3K及p-Akt表达均不同程度减少（P<0.05）;7.RT-PCR结果显示臭牡丹含药血清可以下调NF-κB的表达,上调TNF-α和IL-2 mRNA的表达（P<0.05）。结论:臭牡丹含药血清具有抑制肝癌MHCC97-H细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡并阻止其细胞周期的作用,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路及调节机体免疫相关。第二部分:臭牡丹提取物对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及机制的研究目的:研究臭牡丹提取物对H22实体移植瘤的抑制作用及其可能的机制。方法:皮下接种H22瘤株建立小鼠H22实体移植瘤模型。60只荷瘤鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组和臭牡丹高、中、低剂量组,每组12只,各组分别给予生理盐水、5-Fu(25mg·kg-1,1次/d)及不同浓度的臭牡丹提取物干预。连续给药14d后处死,摘除瘤体并眼球取血,检测小鼠体质量变化、抑瘤率及脾脏和胸腺指数;流式细胞术检测外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞;Western blot法检测PI3K/Akt信号通路中PTEN、PI3K、p-Akt和Akt蛋白的表达水平;ELISA法检测血清中TNF-α和IL-2含量。结果:1.与模型组比较,臭牡丹高、中剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低（P<0.01）,胸腺和脾脏指数增加（P<0.05）;2.各剂量组外周血中CD4+含量增加,CD8+含量降低,CD4+/CD8+比值升高;3.PI3K/Akt信号通路中PTEN蛋白的表达水平上调,PI3K及p-Akt蛋白的表达降低;4.高、中剂量组小鼠血清中TNF-α和IL-2含量含量显著增加（P<0.05）。结论:臭牡丹提取物能够抑制H22实体移植瘤生长,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调节机体免疫功能有关。