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目的: 本研究拟通过实时定量PCR(RQ-PCR)的方法,对急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia,AML)患者骨髓中的微小RNA-215(microRNA-215,miR-215)和微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)的表达进行相关检测,并通过分析miR-215和miR-218在AML患者和正常人骨髓单个核细胞中表达情况的差异对其临床意义进行探讨。 方法: 1、研究对象:miR-215的检测中共收集70例AML患者骨髓标本,对照组为16例正常人骨髓标本。miR-218的检测中共收集71例AML患者骨髓标本,对照组为14例正常人骨髓标本。 2、设计与合成引物:参照相关文献,采用Premier Primer5软件进行miR-215和miR-218及内参U6基因的引物设计。 3、对各研究对象的骨髓单个核细胞进行分离,并对细胞中的总RNA进行提取,然后经逆转录过程将cDNA合成,进行RQ-PCR,对miR-215和miR-218的表达进行检测得到Ct值,分析测定△Ct值。△Ct值=目的基因Ct值-内参基因Ct值。 4、分别对miR-215和miR-218的测定结果与患者临床资料进行分析。 5、对所得到的实验数据进行相关统计学分析。 结果: 1、总RNA纯度分析:通过紫外分光光度计对所提取的总RNA进行分析检测,结果显示大部分OD260/280的比值分布在1.8-2.2之间,纯度较高。 2、U6内参基因和目的基因经扩增后生成熔解曲线,曲线呈单一、锐利的峰表明扩增产物没有产生明显的引物二聚体,没有出现非特异性扩增现象,产物较均一。用2%浓度的琼脂糖凝胶对扩增产物进行电泳分析,观察扩增片段呈单一条带,说明没有非特异性扩增出现和引物二聚体产生。 3、AML患者中miR-215和miR-218的表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。 4、AML患者中miR-215表达与患者的年龄、性别、血红蛋白含量、PLT计数、FAB分组和核型分析之间无相关性(P>0.05),但与白细胞计数有关,低表达组的WBC计数明显高于高表达组(P<0.05); miR-215低表达组患者的NPM1基因突变率高于高表达组患者(P=0.008),其余9种基因突变无相关性。 5、AML患者中miR-218表达与患者的年龄、性别、WBC、Hb含量、PLT计数、FAB分组和核型分析、10种基因突变之间无相关性(P>0.05)。 6、正常核型AML(CN-AML)患者中,miR-215低表达组患者总体生存时间明显低于高表达组(P=0.016); miR-218低表达组患者总体生存时间也明显低于高表达组(P=0.042)。 结论: 1、miR-215和miR-218在AML患者中低表达是一个常见的分子事件。 2、miR-215和miR-218低表达CN-AML患者预后不良。