目的：　　探索结直肠癌细胞系HCT116中是否存在肿瘤干细胞colorectal cancer stem cells(CR-CSCs)，并通过无血清培养基来培养富集肿瘤干细胞，并对培养得到HCT116细胞微球体在特异标志分子、致瘤性、侵袭能力等方面鉴定其性能。为后续的干细胞相关研究提供基础。　　方法：　　将结直肠癌HCT116细胞在含10％胎牛血清中培养，取对数期细胞以小于104个/ml的细胞密度接种在含生长因子的无血清培养基SFM(serumfreemedium)中悬浮培养。无血清培养基具体配置:DMEM/F12培养基中添加葡萄糖(6mg/mL)、胰岛素(25μg/mL)、B27(与培养液体积比1∶50)、ITS液(体积比1∶1000)、腐胺(9.6μg/mL)、肝素(4μg/mL)、孕酮(6.3ng/mL)、EGF(20ng/mL)、bFGF(10ng/mL)。收集培养到7-9天的微球体进行试验。应用免疫荧光术检测微球体表面标志分子CD133、CD44表达、裸鼠成瘤实验检测微球体和HCT116细胞系的体内成瘤、Transwell小室实验检测微球体和HCT116细胞系的体外侵、以及WESTERNBLOT技术检测微球体细胞和HCT116细胞系中干细胞标记蛋白CD44、Musashi-1及Oct4的表达。　　结果：　　HCT116细胞系能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体，SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和增殖。免疫荧光技术发现HCT116微球体中表达CD44、CD133蛋白，而在HCT116细胞中几乎没有细胞表达。在WesternBlot中HCT116微球体中表达CD44、Musashi-1及Oct4蛋白明显高于HCT116细胞(P＜0.05);Transwell小室实验发现HCT116微球体的侵袭能力明显高于HCT116细胞(P＜0.05);在裸鼠成瘤实验中HCT116微球体的体内成瘤能力明显高于HCT116细胞(P＜0.05)。　　结论：　　我们运用无血清培养技术成功的从HCT116细胞系中提取到富含肿瘤干细胞的微球体。并证明其具有干细胞相关性能:特异标志分子、强致瘤性、多项分化能力、自我更新能力。