【摘 要】
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的人兽共患寄生原虫，能感染包括人在内的几乎所有哺乳动物和一些鸟类，全世界约有1/3的人感染弓形虫，严重危害人类和动物的生命
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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的人兽共患寄生原虫，能感染包括人在内的几乎所有哺乳动物和一些鸟类，全世界约有1/3的人感染弓形虫，严重危害人类和动物的生命及健康。本论文主要进行了以下两个方面的研究： 第一部分首次对14株国内外不同宿主及基因型的弓形虫虫株棒状体蛋白13(ROP13)基因进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析，利用BLAST进行同源性搜索，用Clustal X1.81程序对基因序列进行比对，再用PUZZLE4.1程序分析各个虫株之间的遗传距离。同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行相似性分析及计算碱基组成、转换及颠换分析。结果显示，14个虫株扩增片段大小均为1203 bp，共检测到8个变异位点，变异率为0.67％。系统进化树分析表明，ROP13可作为分子标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定，但不能有效地区分弓形虫强、弱毒株及基因型，因此不适合用于弓形虫种内遗传变异的研究。 第二部分构建了pVAX-ROP13真核表达质粒，并转染Marc-145细胞，成功构建了体外真核细胞瞬时表达载体。用PBS稀释到1μg/μL，经后腿肌肉注射100μL免疫昆明鼠，同时设立pVAX-ROP13+pVAX/IL-18联合免疫组，和pVAX I、pVAX/IL-18和PBS三个对照组。初疫后分别于第2 w和第4 w加强免疫一次，测定相应的体液免疫和细胞免疫应答指标。并于三免后第14 d，分别用弓形虫RH株速殖子腹腔感染小鼠和弓形虫PRU包囊株灌胃感染小鼠，并分别观察其存活时间及包囊数。结果显示，pVAX-ROP13免疫组和pVAX-ROP13+pVAX/IL-18联合免疫组免疫昆明鼠均可有效地诱导产生体液免疫和细胞免疫反应，感染RH株的免疫小鼠平均存活时间(24.9±6.3d和32.3±2.7 d)与对照组(7 d)相比明显延长，感染PRU株的免疫小鼠与对照组相比，包囊数明显减少，减虫率明显提高，这表明免疫小鼠均能够有效抵抗弓形虫急性和慢性感染。且pVAX-ROP13+pVAX/IL-18联合免疫组免疫效果明显优于pVAX-ROP13组，表明pVAX/IL-18是一个较好的分子免疫佐剂，能有效增强免疫效果。研究结果为今后进一步研制弓形虫核酸疫苗奠定了基础。
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