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背景:肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)是由多种原因引起的一种严重的慢性肺间质性疾病。主要特征是早期的弥漫性肺泡炎和肺泡持续损伤,后期成纤维细胞大量病理性增殖,伴随细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)异常性汇聚,导致肺结构破坏,最终导致肺纤维化。炎症已被认为是肺纤维化的最初原因,并且上皮-间充质转化(Eβithelial-mesenchymal transition,EMT)是促进肺纤维化进程的重要发病机理。巨噬细胞是一类专业的免疫细胞,在维持免疫稳态方面具有重要作用。在肺纤维化过程中,巨噬细胞也发挥着重要作用,根据所处的微环境以及外界刺激极化为两种不同的功能状态,即经典活化的巨噬细胞(M1)和替代活化的巨噬细胞(M2)而发挥其免疫调控作用。Wnt信号是机体维持组织稳定和损伤修复的关键信号通路,在免疫调节中起着非常重要的作用。白介素17A(IL-17A)是一种能够诱导巨噬细胞极化的的免疫调节剂,并且与宿主防御和各种免疫相关疾病有关。有研究表明,Wnt信号和IL-17都在肺纤维化进程中异常活化。目的:本研究探讨Wnt/β-catenin信号的活化对IL-17A诱导的巨噬细胞极化的调控作用机制,及其对肺脏上皮细胞间质化特性的影响。方法:1、使用含有Wnt配体Wnt3a的条件培养基、Wnt/β-catenin信号抑制剂XAV939以及IL-17A对小鼠巨噬细胞RAW264.7进行预处理,通过扫描电子显微镜对巨噬细胞表面形态进行观察,免疫印迹检测巨噬细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、active-β-catenin(ABC)、TCF-4、Cyclin D1和c-Myc;巨噬细胞极化标志蛋白iNOS以及Argl;巨噬细胞调控因子p-STAT1和p-STAT3以及其下游分子p21、BCL-XL和信号通路调控因子SOCS3;炎症信号通路MAPK相关蛋白p-JNK、p-p38以及p53进行检测。荧光定量PCR方法检测巨噬细胞极化相关标志分子MCP-1、Fizz1以及Ym-1基因表达水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中炎症因子IL-6、IL-10和TNF-α的分泌情况进行检测,运用流式细胞术对巨噬细胞极化相关膜标志分子CD86和CD206进行检测。2、通过分离原代小鼠气管上皮细胞,构建气液相肺脏上皮细胞培养模型,利用该模型与巨噬细胞共培养,使用含有Wnt配体Wnt3a的条件培养基、XAV939、IL-17A以及IL-17A抗体,运用免疫印迹法对上皮细胞全蛋白提取物中上皮-间充质转化标志蛋白α-SMA、Collagen Ⅰ和Vimentin进行检测。结果:1、IL-17A 处理 RAW264.7 细胞后,Wnt/β-catenin 信号通路中 β-catenin、ABC、TCF-4、Cyclin D1和c-Myc均出现表达上调,表明IL-17A能够有效激活Wnt/β-catenin信号,并且IL-17A显示出协同增强Wnt3a激活的Wnt/β-catenin信号的能力。2、Wnt/β-catenin信号的激活能够抑制IL-17A诱导的I型极化,减缓IL-17A对巨噬细胞Ⅱ型极化的抑制。分子机制研究表明,Wnt/β-catenin信号的激活可以部分的减少p-STAT3的表达以抑制IL-17A诱导的巨噬细胞M1型极化,同时增加p-STAT1的表达来减缓IL-17A抑制的巨噬细胞M2型极化。同时,Wnt/β-catenin信号可以通过与IL-17A相互协同来激活p38 MAPK信号通路。3、在EMT过程中,Wnt 3a能够抑制肺脏上皮细胞间质化相关Vimentin和α-SMA的表达,并且能够有效抑制IL-17A诱导的Vimentin表达;IL-17A抗体对Vimentin表达没有明显作用,但能够诱导α-SMA的表达。而Wnt3a和IL-17A均能诱导上皮细胞Collagen Ⅰ的表达。说明Wnt/β-catenin信号的激活能够减缓IL-17A导致的EMT进程。结论:IL-17A能够有效激活Wnt/β-catenin信号,且与Wnt3a相互协同;Wnt/β-catenin信号通路的活化可下调p-STAT3的表达来抑制IL-17A诱导的巨噬细胞M1型极化,上调p-STAT1的表达来减缓IL-17A抑制的巨噬细胞M2型极化,并通过与IL-17A相互协同激活p38 MAPK信号通路。此外,Wnt3a能够减缓IL-17A导致的EMT进程。综上所述,Wnt/β-catenin信号能够抑制IL-17A介导的巨噬细胞M1极化,缓解抑制的M2型极化以减缓肺脏上皮细胞的EMT进程。