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牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海洋经济鱼类，其雌性个体生长快的特性使得性别控制研究倍受重视。本文利用EST提示信息，经RACE等方法克隆了性别相关基因Wingless-type MMTV integration site family, member4(wnt4)、androgen receptor(ar)、LIM homeobox1(Lhx1)和R-sponding1(rspo1)等，通过RT-PCR和real-time PCR分析其在牙鲆雌雄成鱼各组织分布，以及wnt4和Lhx1在性腺发育各期的表达特征，并比较了wnt4和cyp19a1a、dmrt1在幼鱼性腺分化期的表达趋势，从而为鱼类性别控制研究提供了基础数据。牙鲆wnt4基因全长cDNA序列（GenBankAccession No.JX999942）为1584bp，包括5’非翻译区129bp，3’非翻译区396bp，开放阅读框1059bp，编码一条由352个氨基酸残基组成的蛋白序列，包含一个跨膜区及一个wnt家族结构域，同源性比较结果显示与其他硬骨鱼类WNT4a相近。wnt4基因在雌雄鱼各组织中广谱表达，有卵巢强于精巢1.5倍的性别二态性；性腺中仅在III、IV期有递减表达。同时比对了cyp19a1a、dmrt1与wnt4在牙鲆雌核发育和高温性反转幼鱼性腺分化期的表达，发现wnt4在整个性腺分化过程中处于缓慢递增状态，并且在精巢分化前有突然的升高，可以认为wnt4在幼鱼性腺分化期起到了一定的作用。牙鲆ar基因全长cDNA序列为3215bp，包括5’非翻译区97bp，3’非翻译区1051bp，开放阅读框2067bp，其DNA结合域（DBD）上有与性别相关基因er、Pax4、Pax6的结合位点，并预测到5’UTR和ORF上有一个840bp长度的CpG岛。牙鲆ar基因编码一条由688个氨基酸残基组成的蛋白序列，同源性比较显示较接近于硬骨鱼类ARa。ar基因在雌雄鱼组织中广谱表达，有精巢强于卵巢1.8倍的性别二态性。使用TRANSFAC6.0分析牙鲆erα和erβ基因cDNA序列，并通过genomewalking克隆获得了905bp的erα上游启动子区序列。分析发现在erα DBD区域有与性别相关基因Pax4、gata4、oct1和foxl2的结合位点，但是该上游启动子区并没有转录因子结合位点，在其cDNA和启动子区也没有发现CpG岛。同时在erβ DBD区域也发现有与性别相关基因Pax4、oct1的结合位点，并检测到4个长度为228bp、292bp、218bp和359bp的CpG岛。erα在雌雄鱼除肌肉和肾脏以外各组织都有表达，有卵巢强于精巢1.14倍的性别二态性。牙鲆Lhx1a和Lhx1b基因开放阅读框序列（GenBankAccession No.JX999940&JX999941）分别为1224bp和1206bp，各编码一条由407和401个氨基酸残基组成的蛋白序列，都包含两个LIM结构域和一个HOX结构域。牙鲆Lhx1a和Lhx1b都仅在性腺、脑和眼中表达，但是Lhx1a仅在精巢中表达，而Lhx1b在卵巢中的表达强于精巢；Lhx1a仅在精巢III和IV期表达，Lhx1b在精巢和卵巢期III、IV期中都有表达。获得牙鲆rspo1基因783bp的开放阅读框序列，编码一条由260个氨基酸残基组成的蛋白序列，包含两个FU结构域和一个TSP结构域。该基因在雌雄鱼组织中的表达也较为广泛，并且有卵巢略强于精巢的性别二态性。综上所述，牙鲆wnt4、ar、er、Lhx1和rspo1都是性别相关基因，在性腺中有性别二态性表达，其中wnt4与性腺分化发育相关，Lhx1与性腺发育相关。