论文部分内容阅读
目的:观察电针对窒息性脑性瘫痪（Cerebral palsy,CP）新生大鼠海马、纹状体和运动皮质内神经生长相关蛋白（Growth associated protein,GAP-43）表达的影响,探讨电针治疗脑瘫的意义及机制。方法:1、7日龄新生Sprague-Dawley（SD）大鼠72只,随机分为假手术组、CP造模组、CP+电针组3组,每组24只。各组大鼠再随机分为术后3、7、14、21d4个时间组,每组6只;2、3组大鼠在吸入乙醚浅麻醉的状态下,取颈前正中切口,电针组、造模组分离左侧颈总动脉并结扎,置于氧气浓度为8%、氮气浓度为92%的密闭氮氧仓中缺氧2h,以Longa评分2～3分的实验鼠视为成功模型,随机纳入电针组和造模组;假手术组仅分离左侧颈总动脉即缝合切口,3组大鼠于术后返回母鼠笼中喂养;3、电针组于造模后24h开始治疗,选取百会、大椎、脊中、后会等穴位针刺,针接G6805-Ⅱ电针仪,每日2次,各时间组在最后1日第2次治疗后2h处死取材;4、取前囟前1～3mm（观察运动皮质区和纹状体区）、前囟后3～5mm（观察海马区）各厚2mm的两块冠状脑组织切片,片厚4μm。每块大鼠脑组织各制作一张免疫组化染色（SABC法）及一张HE染色的切片;5、采用LeicaIM50图像采集系统对各组免疫组化切片进行图像采集,在不同大鼠左侧脑组织切片的海马(CA1-3)区、纹状体区和运动皮质区6个完整而不重叠的高倍镜视野（×400）采图,应用Image-Pro Plus图像分析软件对每个视野下阳性反应物的平均光密度和阳性面积率进行测定,观察GAP-43在大鼠脑组织切片的左侧海马(CA1-3)区、纹状体区和运动皮质区表达的变化。结果:1、光镜下观察HE染色切片可见,假手术组各时间点脑组织形态基本正常。造模组和电针组大鼠各时间点左侧脑组织在不同区域出现典型的凋亡细胞形态变化,细胞染色质浓缩、聚集于核边缘成块状、环状或新月状;细胞体积缩小、核固缩深染、细胞膜出泡、凋亡小体形成。未凋亡神经元细胞胞体肿胀,变大,胞浆染色变浅。7、14、21d大鼠脑组织凋亡细胞有减少的趋势,神经元变性逐渐消失;2、各组GAP-43免疫组化染色阳性物质呈棕黄色颗粒,聚集于神经元胞体及轴突。假手术组免疫阳性颗粒染色浅,数量少;而造模组和电针组海马、纹状体及运动皮质神经细胞胞浆可见大量深棕色GAP-43免疫阳性颗粒,其中运动皮质各层神经细胞均有阳性反应;3、与假手术组比较,造模组和电针组在不同的脑区各时间点GAP-43表达的平均光密度与阳性面积率都显著增高（P＜0.01）;电针组在大多数时间点GAP-43表达的平均光密度与阳性面积率高于造模组（P＜0.05或P＜0.01）。从同一组内不同时间点之间的比较来看,假手术组在不同脑区各时间点GAP-43的表达均无明显变化,而造模组和电针组GAP-43表达高峰大多出现在手术后7d,随后呈下降趋势。结论:电针早期介入对脑瘫的治疗有积极作用;增强GAP-43长时程表达,促进神经细胞再生和突触重建,可能是针刺治疗窒息性脑瘫的重要机制。