版纳甜龙竹愈伤组织诱导与植株再生体系的建立

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本研究以版纳甜龙竹成熟种胚为试验材料,研究了基本培养基及植物激素对种胚愈伤组织诱导、愈伤组织增殖、愈伤组织分化及再生苗壮苗生根的影响,筛选出各培养阶段适宜的培养基组分与培养条件,首次建立了高效稳定的版纳甜龙竹植株再生体系,为竹子的组织培养及转基因研究奠定了基础。试验结果具体如下:1.种胚愈伤组织诱导的适宜培养基为MS基本培养基,添加2,4-D 3 mg·L-1、脯氨酸(Pro)500 mg·L-1、谷氨酰胺(Gln)500 mg·L-1、水解酪蛋白(CH)500 mg·L-1时愈伤组织诱导率和良好愈伤组织诱导率较高,分别达80%和60%左右。2.添加低浓度KT(0.5 mg·L-1)愈伤组织增殖效果与对照相比无显著差异,而高浓度KT(1或2 mg·L-1)抑制愈伤组织的增殖,愈伤组织继代几次后普遍褐化严重,失去增殖与分化能力。3.正交实验表明,愈伤组织分化的适宜培养基为MS + 2 mg·L-1 BA + 4 mg·L-1 KT + 1 mg·L-1 NAA+ 30 g·L-1蔗糖+ 0.8% Type A agar,愈伤组织分化率高达89.5%,再生植株伸长生长良好。4.当IBA浓度为5 mg·L-1时试管苗十天左右即诱导出根,平均每植株生根数7-8条,生根率达80%以上。生根试管苗移植到泥炭:蛭石:珍珠岩=1:1:1的混合基质中,植株成活率达100%。5.组织细胞学观察表明版纳甜龙竹种胚愈伤组织分化既有器官发生途径又有体细胞胚胎发生途径。6.农杆菌转化的版纳甜龙竹抗性愈伤组织分化获得一批转基因白化苗,抗性愈伤组织及转基因再生苗经GUS染色显蓝色呈阳性。
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