世界盐碱地面积大约占陆地面积的1/3。中国拥有各种类型盐碱地1×10~6平方公里,其中可耕地盐碱化面积已经达到7.6万平方公里,由于各种不合理的土地利用方式,导致盐碱化土地面积正在不断的扩大。枸杞以其优越的防风固沙、改良土壤和改善生态环境等生态效益,成为了西北荒漠和盐碱地治理的首选植物,并且由于在食用、营养和药用方面的价值近年来得到了人们的密切关注。为了解决盐碱地的合理利用问题和植物对盐碱地的改良问题,许多学者探究了盐害对植物伤害机理,克隆了许多盐相关基因,并且获得转基因植物具有很高的耐盐性,从而显示出诱人的前景。本研究通过对3个枸杞品种种子萌发、根系发育和抗盐基因表达对盐胁迫的响应和表型分析,评价了3个枸杞种质的耐盐性强弱,为解析枸杞抗盐机制的遗传差异奠定了材料基础。将实验室使用RACE方法从宁夏枸杞中克隆的Lb HKT1基因在番茄中作了过表达,以便进一步验证其功能。结果如下:(1)通过对0 mmol/L、100 mmol/L Na Cl处理下3种枸杞的种子萌发率和萌发数进行显著性差异分析,获得种子萌发的抗盐能力由强到弱的顺序为:黑果枸杞最强,宁杞1号和宁杞7号最弱且两者种子抗盐能力强弱无差异。(2)通过组培的方式获得三个品种枸杞的种子苗,对其进行0 mmol/L、150mmol/L、200 mmol/L的MS培养基盐胁迫处理后统计主根生长和侧根数目的变化,分析三个枸杞品种根系对盐的耐受性。发现150 mmol/L和200 mmol/L处理下黑果枸杞根系耐盐性最强,宁杞7号次之、宁杞1号最弱。(3)对培养基上盐处理后的幼苗叶片进行NBT和DAB组织化学染色,观察活性氧的变化。发现黑果枸杞叶片着色最浅,活性氧积累最少,宁杞7号次之、宁杞1号最多,说明受到氧化胁迫最小的为黑果枸杞,最多的为宁杞1号。(4)在持续12h的200mmol/L Na Cl处理下,Lb HKT1基因在宁杞7号叶片的表达量逐渐降低,而在宁杞1号和黑果中都是先升高后降低,最终回到对照水平。表明Lb HKT1在宁杞1号和黑果枸杞的短期盐响应中发挥着重要作用,同时也表明不同枸杞品种的抗盐机制不尽相同且在黑果枸杞中表达量多数时段高于对照组。(5)为探究克隆的枸杞Lb HKT1基因的抗盐功能,将其构建到植物双元过表达载体p CAMBIA1304上,并转化到农杆菌GV3101中,使过表达载体通过农杆菌介导法转化入Micro-Tom番茄。通过抗生素筛选和PCR鉴定筛选出T0代阳性苗,并将收获的T0代种子催芽后种下,提取DNA,PCR扩增其叶片目的条带确定是否稳定遗传。