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目的:本实验以中医经典“嫉妒不孕”学说与西医心理应激学说的相通性为理论基础,制备心理应激模型小鼠,通过检测小鼠卵母细胞线粒体功能,卵母细胞内凋亡因子水平等,探讨心理应激导致机体内活性氧自由基水平升高对小鼠卵母细胞线粒体功能的影响,进而影响小鼠卵母细胞凋亡水平,为中医“嫉妒不孕”学说中蕴含的肝郁导致女性不孕理论提供科学依据。方法:实验一:心理应激对小鼠卵母细胞内线粒体功能的影响制备强、中、弱程度心理应激小鼠模型,取各组小鼠卵母细胞,采用实时荧光定量PCR法检测线粒体mt DNA拷贝数,Mito-Tracker Green(线粒体绿色荧光探针)检测线粒体分布,利用生物荧光技术检测各组小鼠卵母细胞ATP水平,利用酶免法检测卵母细胞中8-OHd G表达水平。以研究心理应激对小鼠卵母细胞内线粒体功能的影响。实验二:心理应激对小鼠卵母细胞凋亡水平的影响采用RT-PCR及Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cyt C及Caspase-3凋亡通路因子水平,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)测定卵母细胞凋亡率。以研究心理应激对小鼠卵母细胞凋亡水平的影响。结果:实验数据采用SPSS21.0统计软件进行分析处理。多组间计量资料比较采用单因素方差分析,进一步进行组间两两比较时,若方差齐时,采用LSD(Fisher’sleastsignificant difference test)检验,若方差不齐时,采用Dunnett’s T3检验。以P<0.05为差异有统计学意义。实验一1.各组小鼠卵母细胞线粒体mt DNA表达水平心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内线粒体mt DNA表达水平均低于正常组,进一步两两比较显示,与正常组相比,强、中刺激组小鼠卵母细胞内mt DNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与强刺激组相比,中、低刺激组小鼠卵母细胞mt DNA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中刺激组相比,弱刺激组小鼠卵母细胞mt DNA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.各组小鼠线粒体分布随着刺激强度增加,各组卵母细胞线粒体分布不均匀程度增加,正常组小鼠卵母细胞线粒体均匀分布,强刺激组小鼠卵母细胞线粒体分布明显偏于一侧,中刺激组小鼠卵母细胞线粒体分布于胞质中央与边缘,弱刺激组小鼠卵母细胞线粒体分布较正常组无明显差异。3.各组小鼠卵母细胞ATP水平心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内ATP水平均低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);进一步两两比较显示,随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内ATP水平降低,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。4.酶免法检测卵母细胞内8-OHd G表达水平心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内8-OHd G表达水平均高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);进一步两两比较显示,随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内8-OHd G表达水平升高,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。实验二1.各组小鼠卵母细胞凋亡通路因子Bcl-2,Bax,Cytc,Caspase-3水平心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内抑凋亡因子Bcl-2水平低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);进一步两两比较显示,随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内抑凋亡因子Bcl-2水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内促凋亡因子Bax,Cytc,Caspase-3水平均高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);进一步两两比较显示,随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内凋亡通路因子Bax,Cytc,Caspase-3水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.各组小鼠卵母细胞凋亡程度随着心理应激刺激强度的增加,小鼠卵母细胞凋亡率逐渐上升,与正常组相比,强刺激组小鼠卵母细胞凋亡率明显升高且有统计学差异(P<0.05),中刺激组与弱刺激组小鼠卵母细胞凋亡率有所升高,但与正常组相比无统计学差异;与强刺激组相比,中刺激组和弱刺激组小鼠卵母细胞凋亡率降低,且均有统计学差异(P<0.05);与中刺激组相比,弱刺激组小鼠卵母细胞凋亡率较低,二者相比无统计学差异。结论:1.心理应激能够影响卵母细胞线粒体功能,导致线粒体mt DNA拷贝数减少,细胞内ATP含量降低,线粒体在细胞内分布不均,DNA氧化损伤标志物8-OHd G水平上升;且心理应激刺激程度越强,对线粒体功能的损伤越严重,线粒体作为给卵母细胞供能的最重要的细胞器,其功能受损可直接导致卵母细胞质量下降,影响卵巢功能,导致女性不孕的发生。2.心理应激可导致卵母细胞凋亡率上升,卵母细胞内促凋亡因子水平上升,抑凋亡因子水平下降;且心理应激刺激程度越严重,卵母细胞内促凋亡因子表达量越高,抑凋亡因子表达量越低,卵母细胞凋亡水平越高,卵巢储备功能减退越严重。3.心理应激与中医肝郁理论在病因及临床症状方面类似,心理应激通过影响卵母细胞内线粒体能量供应从而导致卵母细胞凋亡率上升,卵巢储备功能减退,其过程与中医理论肝郁克脾,脾主运化功能失常导致后天之精与先天之精难以相互培补,进而影响肾主生殖功能具有高度统一性。通过进一步实验验证,为中医临床疏肝健脾,补肾种子法提供现代医学理论依据。