本研究将含有β-甘露聚糖酶基因(ManI)的重组质粒pGEM-ManΙ经EcoRΙ、绿豆芽核酸酶、HindⅢ酶切处理和纯化后，获得目的基因（β-甘露聚糖酶基因）。同时，含有Ω序列和T7启动子以及信号肽OmpT序列的分泌型表达载体pT002经BamHΙ、绿豆芽核酸酶、HindⅢ酶切处理。将目的基因连接在pT002质粒信号肽OmpT之后，构建表达载体pT002-ManΙ。将表达载体pT002-ManΙ转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，通过筛选获得阳性克隆子。对阳性克隆子进行PCR及酶切鉴定，并对载体中插入的目的基因进行测序。测序结果与GenBank中的里氏木霉RutC-30的β-甘露聚糖酶成熟肽cDNA序列同源性比较，结果二者序列完全一致。将表达载体pT002-ManΙ和质粒pUC18-kil共转化到大肠杆菌BL21（DE3）株，构建了外分泌型表达体系，经IPTG诱导，重组蛋白获得高效表达，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，表达的重组蛋白分子量约为51kD。将培养液浓缩纯化后，以槐豆胶为底物用3,5—二硝基水杨酸法（DNS）测定培养液中β-甘露聚糖酶的活力。纯化后的产物具有明显的β-甘露聚糖酶活性，证明重组β-甘露聚糖酶在分泌过程中得到正确加工。