【摘 要】
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目的:白介素-12(interleukin- 12, IL-12)是具有抗瘤活性的细胞因子,构建能在真核细胞内稳定表达小鼠白介素-12(murrine interleukin- 12 interleukin- 12, mIL-12)的质粒,建
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目的:白介素-12(interleukin- 12, IL-12)是具有抗瘤活性的细胞因子,构建能在真核细胞内稳定表达小鼠白介素-12(murrine interleukin- 12 interleukin- 12, mIL-12)的质粒,建立稳定表达小鼠IL-12(mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma, LLC)细胞系LLC/ mIL-12,为进一步研究IL-12的免疫调节机制和抗瘤免疫反应奠定基础。方法:通过聚合酶链反应(PCR)扩增质粒pORF- mIL-12(Elasti,全长),双酶切后将目的片段mIL-12连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)质粒上,mIL-12受pcDNA3.1(+)中mCMV启动子驱动,将mIL-12全长转录至同一mRNA上,对重组质粒进行鉴定后用脂质体转染小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)测其表达。流式细胞仪(FCM)观察细胞周期和凋亡, G418筛选获得阳性克隆后大量培养并检测mIL-12活性。结果:PCR成功扩增出mIL-12片段,PCR鉴定、酶切鉴定及测序均证实pcDNA3.1(+)-mIL-12质粒构建成功, RT-PCR及ELISA证实重组质粒在mRNA及蛋白质水平均高表达mIL-12。mIL-12使LLC细胞周期重新分布,并促进其凋亡。LLC/ mIL-12细胞培养上清能明显引起刀豆蛋白A(ConA)激活的小鼠脾细胞增殖。结论:pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达质粒构建成功并能在LLC细胞中稳定表达,成功建立具有mIL-12生物学活性的LLC细胞系。
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