目的:观察连合下器Nestin、Sox2及BrdU阳性细胞形态特征及意义。　　 方法:选择SD大鼠32只，清洁级，雌雄不限，6-8周龄，体重200g±20g，将实验动物随机分为两组:①对照组(n=17):不作任何处理;②用药组(n=15):连续三天腹腔注射BrdU，每天两次，分别于16:00和18:00各一次，时间间隔为2小时。　　 1、标本取材。　　 (1)正常动物模型标本取材:将SD大鼠17只，在水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉下，经由升主动脉灌注4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L，PH7.2)进行固定，立刻取脑，后固定。将组织标本随机分为两组，选取含连合下器部分，一组进行脱水，透明，包埋，石蜡切片机冠状面切片，厚度为5μm。另一组进行15％蔗糖溶液脱水，30％蔗糖溶液脱水，恒温冰冻切片机冠状面切片，厚度为10μm。　　 (2) BrdU标记动物模型标本取材:SD大鼠15只，按照50mg/Kg对实验动物进行连续三天BrdU生理盐水溶液腹腔注射，每天两次，间隔时间为2小时。第四日上午水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉后，经由升主动脉灌注4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L，PH7.2)固定，立刻取脑，后固定。将组织标本随机分为两组，选取含连合下器部分，一组进行脱水，透明，包埋，石蜡切片机冠状面切片，厚度为5μm。另一组进行15％蔗糖溶液脱水，30％蔗糖溶液脱水，恒温冰冻切片机冠状面切片，厚度为10μm。　　 2、染色。　　 (1)甲苯胺蓝染色:将上述标本取材中获得的石蜡切片经甲苯胺蓝染色，中性树胶封片后Olympus BX-UCB观察照相。　　 (2)免疫组织化学染色:将上述标本取材中获得的石蜡切片分别经Nestin免疫组织化学染色、Sox2免疫组织化学染色和BrdU免疫组织化学染色后，使用中性树胶封片之后Olympus BX-UCB观察照相。　　 (3)免疫荧光组织化学双标染色:将上述标本取材中获得的冰冻切片分别经Nestin+Sox2免疫荧光组织化学双标染色、BrdU+Sox2免疫荧光组织化学双标染色后，使用抗荧光衰减封片剂封固后，Olympus BX-UCB观察照相。　　 3、统计学处理。　　 实验结果中所示阳性细胞采用专业图像分析软件Image-Pro Plus6.0测定平均光密度值和大小。经SNK-q检验，以P＜0.05为有显著性差异。　　 结果:　　 1、甲苯胺蓝染色结果观察。　　 冠状面切片经甲苯胺蓝染色后，通过光镜观察可见:SCO与第三脑室侧壁室管膜分界鲜明，由两层细胞构成:一层是靠近室管膜的室管膜细胞层，染色较深，靠近脑室面（腹侧）的一半无明显细胞结构，呈均质状，染色不均匀，血管少，另一半远离脑室面（背侧），细胞轮廓界限清楚，整齐排列，染色较腹侧侧稍深，但在两侧面，各有一处染色略浅，形状似猫耳状，细胞结构不清，组织排列疏松，值得注意的是这两个区域周围血管丰富;另一层为其深面的室管膜下细胞层，染色较浅，与周围脑组织细胞形态一致，无细胞结构，但可见纤维样结构。两层细胞呈极性排列。第三脑室侧壁的细胞间的界限清楚，排列整齐，由单层立方上皮细胞构成，可以清晰分辨细胞轮廓，细胞表面光滑，核大小不等，呈现圆形或椭圆形。SCO内有毛细血管的分布，数量较周围脑区略多，靠边缘部居多。　　 2、免疫组织化学染色结果观察。　　 2.1、Nestin: nestin免疫阳性细胞密集分布于SCO区域，与周围脑区界限明显。nestin阳性细胞的胞体多分布于SCO的两侧部，中央部少见，免疫阳性细胞走行方向不同，可见着色密集区，两侧对称分布，似猫耳状，并且周围有一个血管走行。室管膜下细胞层和其他脑区中可见散在分布。nestin免疫阳性产物主要存在于细胞质及其突起。通过冠状面切片观察，细胞染色较强，数量较多，阳性细胞形态多表现为各种星状或放射状突起，阳性细胞在侧脑室和脉络丛切片可观察到。细胞的突起一方面由腹侧向背侧走向，从第三脑室顶部穿过SCO和后连合向背侧软脑膜放射，终止于软脑膜;另一部分突起较密集向腹侧发出，多见于室管膜细胞层腹侧的均质状结构内，两侧向中央集中。SCO室管膜细胞层Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0.0357±0.0013，室管膜下细胞层Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0.0098±0.0019。SCO室管膜细胞层与室管膜下细胞层比较结果显示有显著性差异(P＜0.05)。　　 2.2、Sox2:Sox2免疫阳性细胞在SCO区域弥散分布，染色较强，数量较多，所染阳性细胞核多呈现圆形或椭圆形，在室管膜层腹侧的一半无阳性表达，室管膜下细胞层阳性细胞在两侧部少，第三脑室侧壁细胞呈单层排列，其他区域可见散在分布。Sox2免疫阳性产物主要存在于细胞核。阳性细胞于侧脑室室管膜处可见单层紧密排列。　　 2.3、BrdU:本实验在冠状切面上SCO内零星分布BrdU免疫阳性细胞，位置不固定。　　 3、免疫荧光组织化学结果的观察。　　 3.1、BrdU、Sox2免疫荧光组织化学结果观察:通过冠状面切片观察，可见SCO室管膜细胞层的背侧Sox2免疫阳性细胞数量较多，呈对称性分布，细胞核多呈现圆形或椭圆形。Sox2免疫阳性细胞在第三脑室侧壁室管膜处呈单层排列，其他区域呈现散在分布。BrdU免疫荧光阳性细胞数量少，呈绿色。有少量细胞同时存在双标阳性表达。　　 3.2、Nestin、Sox2免疫荧光组织化学结果观察:通过冠状面切片观察，可见nestin免疫阳性细胞主要位于SCO室管膜层腹侧。第三脑室侧壁未出现阳性表达，细胞突起表现为丝状、絮状，由第三脑室顶部向背侧放射。Sox2免疫阳性细胞在SCO的室管膜层背侧集中分布，数量较多，所染阳性细胞核多呈现圆形或椭圆形，背侧为小细胞两侧为大细胞。在SCO的室管膜细胞层集中分布，第三脑室侧壁室管膜处呈单层排列，其他区域可见散在分布。有一部分细胞同时存在双标阳性表达。　　 结论:　　 1、Nestin免疫阳性细胞多分布于SCO的室管膜层外侧部的大细胞，其突起较长，可向背侧穿行后连合达软膜下，向腹侧穿行室管膜的均质层。　　 2、Sox2免疫阳性细胞在SCO室管膜细胞层密集分布;BrdU免疫阳性细胞呈零星分布。　　 3、Nestin、Sox2免疫荧光双标细胞和BrdU、Sox2免疫荧光双标细胞多分布于SCO室管膜层的外侧部。