【摘 要】
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目的:构建结核分枝杆菌19KD-ESAT6融合蛋白的重组质粒,在大肠埃希菌中表达纯化后检测其抗原性,研究该蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值。方法:运用PCR技术从结核分枝杆菌
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目的:构建结核分枝杆菌19KD-ESAT6融合蛋白的重组质粒,在大肠埃希菌中表达纯化后检测其抗原性,研究该蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值。方法:运用PCR技术从结核分枝杆菌标准株H37Rv中扩增获得19KD和ESAT6基因片段,将目的片段分别克隆到pMD18-T载体,再亚克隆目的片段到同一表达载体pET21a,构建重组表达载体pET21a-19KD-ESAT6,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),表达纯化后用Western blot法分析其抗原反应性。建立间接ELISA方法,检测161例临床血清标本。结果:成功构建重组质粒pET21a-19KD-ESAT6,并在大肠埃希菌中获得高效表达。SDS-PAGE结果显示,在约29KD处有表达条带。Western blot结果表明融合蛋白19KD-ESAT6与确诊的结核病患者血清发生特异性免疫反应。以融合蛋白19KD-ESAT6为包被抗原建立间接ELISA法,70例临床确诊的肺结核患者中28例阳性,敏感性为40%;39例非结核病患者中1例阳性,52例健康人血清中2例阳性,特异度为96.7%。结论:结核分枝杆菌19KD-ESAT6融合蛋白具有特异的免疫原性,融合蛋白的敏感性高于各单个蛋白抗原。本研究为结核病血清学诊断试剂的开发提供了依据。学诊断
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