实验背景和意义:近些年来研究证实,外周和中枢神经的损伤可以引起星形胶质细胞激活。肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)由52个氨基酸组成,是降钙素基因相关肽的家族成员,是近些年来证实参与疼痛发生的神经肽。本研究以实验室之前的研究成果为基础,提出AM可以激活星形胶质细胞并参与疼痛的发生。为了进一步探究其具体机制,我建立了一种可以大批量获得生长状态好且纯度高的星形胶质细胞的原代培养方法,进而研究AM对星形胶质细胞的活化作用;在此基础上,检测给大鼠鞘内注射AM刺激的星形胶质细胞对大鼠机械痛敏感性的影响,并通过在体和离体实验检测大鼠脊髓中信号通路、炎性因子和趋化因子的表达情况。研究方法:建立了一种可以大批量获得生长状态好且纯度高的星形胶质细胞的原代培养方法;用AM刺激星形胶质细胞模拟“活化”后,用western blot、免疫荧光法和qRT-PCR等技术综合分析AM对星形胶质细胞活化的影响及鞘内注射AM刺激的星形胶质细胞对大鼠脊髓中信号通路、炎性因子和趋化因子的变化情况。研究结果如下:(1)大批量得到生长状况好且纯度高的星形胶质细胞。(2)AM可以激活星形胶质细胞,使星形胶质细胞中的GFAP、P-JNK、RAMP2、CLR、TNF-α、IL-1β表达上调。(3)鞘内注射AM刺激的星形胶质细胞,增加了大鼠机械痛的敏感性。且大鼠脊髓中GFAP、P-JNK、TNF-α、IL-1β表达上调,增加了大鼠机械痛的敏感性。(4)AM可以激活星形胶质细胞,上调星形胶质细胞中CCL2的表达;用D-JNKI-1作用后,可以显著抑制由AM诱导的星形胶质细胞中CCL2表达的上调。脊髓背角CCL2的mRNA水平表达上调会增加大鼠机械痛的敏感性。实验结论:AM可以经过作用AM1受体直接激活星形胶质细胞,引起星形胶质细胞形态及功能的改变。鞘内注射AM刺激的星形胶质细胞,增加大鼠机械痛的敏感性,这一作用通过CCL2和JNK信号通路介导。