肺癌是恶性肿瘤中导致死亡的主要原因之一,尽管近些年来肺癌的相关治疗已经取得了较大的进步,但是由于表观遗传等复杂因素在肿瘤的生长和侵袭中起着重要的作用,患者长期生存率仍旧不高。因此,发现新的癌基因/抑癌基因并阐明其作用机制是防治肿瘤的重要任务。近年来Wnt和Hippo信号通路与肿瘤的发生、进展的关系备受重视。Wnt信号是一条在物种进化过程中高度保守的信号转导通路,与胚胎发育、细胞增殖、分化和凋亡等生理过程有着紧密的联系。另外,Hippo信号是最早在果蝇中发现的信号通路,在物种进化中高度保守,与器官体积的调节,组织再生,细胞极性,肿瘤的形成有着密切的联系。而Hippo通路与Wnt通路之间也有着广泛的交互作用,其中Dvl分子就是两通路关键节点蛋白之一。最新的研究表明:在斑马鱼体内,Lurap1可与Dvl2相互作用,二者的结合抑制了Dvl的膜募集,进而影响斑马鱼细胞骨架的形成。那么在肺癌中,Lurap1是否也能够与dvl相互作用来调控Wnt和Hippo通路活性,进而影响肺癌细胞的恶性表型?这引起了我们的极大兴趣。目的:探讨富亮氨酸衔接蛋白Lurap1(leucine repeat adaptor protein 1)在非小细胞肺癌(NSCLC,non-small cell lung cancer)中的表达情况,及对其增殖和侵袭的影响和相关作用机制。研究方法:1、通过免疫组化和免疫荧光分析Lurap1在肺癌组织中的表达及与临床病理因素之间的关系。2、通过MTT、集落形成、Transwell等实验方法观察双向调控Lurap1的表达其对肺癌细胞增殖、侵袭的生物学功能的影响。3、通过Western Blot观察双向调控Lurap1的表达对Wnt和Hippo信号通路的影响及可能的作用机制。结果:1、Lurap1在支气管上皮细胞和正常支气管上皮细胞系中呈阳性表达(阳性率86.5%,32/37),而在肺癌组织和肺癌细胞系中表达减少(阳性率51.02%,75/147)。统计学结果显示Lurap1的高表达与肺癌的分化呈正相关,与TNM分期和淋巴结转移呈负相关。TCGA数据库提供的生存分析显示Lurap1高表达患者的生存期明显长于低表达患者。2、在A549和H1299细胞系中分别转染和干扰,发现过表达Lurap1抑制了细胞的增殖和侵袭(P<0.05),而干扰Lurap1蛋白表达后促进了细胞增殖与侵袭(P<0.05)。3、Lurap1能够抑制Wnt信号通路的活性。在A549和H1299细胞系中过表达Lurap1,发现Wnt信号通路关键蛋白P-Dvl2表达下调、P-GSK3β表达下调,下游靶基因cyclin D1、c-Myc表达下调,而β-catenin入核减少。干扰Lurap1蛋白表达发现Wnt信号通路关键蛋白P-Dvl2表达上调、P-GSK3β表达上调,下游靶基因cyclin D1、c-Myc表达上调,而β-catenin入核增多。4、Lurap1能够激活Hippo信号通路的活性。在A549和H1299细胞系中过表达Lurap1,发现Hippo信号通路关键级联磷酸化蛋白P-MST1、P-Lats1、P-YAP表达上调,下游靶基因cyclin E、CTGF表达下调,而YAP入核减少。而干扰Lurap1蛋白表达发现Hippo信号通路关键级联磷酸化蛋白P-MST1、P-Lats1、P-YAP表达下调,下游靶基因cyclin E、CTGF表达上调,而YAP入核增多。5、Lurap1抑制NSCLC细胞的EMT过程。在A549细胞系中过表达Lurap1,发现EMT关键蛋白E-cad和ZO1表达上调,N-cad表达下调。而干扰Lurap1蛋白表达发现EMT关键蛋白E-cad和ZO1表达下调,N-cad表达上调。6、NSCLC细胞中Lurap1能够与Dvl1、2、3结合。在A549和H1299细胞系中过表达Lurap1后,发现过表达的Lurap1分别能够与Dvl1、2、3结合。结论:1、Lurap1在NSCLC细胞浆中低表达,其表达与NSCLC患者的TNM分期和淋巴结转移相关。2、过表达Lurap1能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。3、Lurap1通过抑制Wnt通路并激活Hippo通路来抑制非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭。4、在NSCLC中,Lurap1能够与Dvl1、2、3结合。