【摘 要】
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本论文研究影响动物卵泡发育的基因的克隆、重组蛋白的制备及在促进卵泡发育提高反刍动物超排胚胎生产的新技术新方法。
第一部分工作探讨了长期免疫抑制素α亚基(Inhib
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本论文研究影响动物卵泡发育的基因的克隆、重组蛋白的制备及在促进卵泡发育提高反刍动物超排胚胎生产的新技术新方法。
第一部分工作探讨了长期免疫抑制素α亚基(Inhibin,IHN)或联合免疫IHN和卵泡抑素(Follistatin,FSP)对多次超排后持续提高奶牛超排后胚胎产量的可行性。试验选取21头14月龄左右青年荷斯坦牛,随机分为IHN组7头、IHN+FSP组7头、对照组7头。IHN组首次免疫重组猪IHNα亚基融合蛋白1ml/头,IHN+FSP组是IHN和FSP各1ml/头,浓度为1mg/ml,均为臀部肌肉注射,并在第28天、58天、88天进行加强免疫,免疫剂量依然是1ml/头,浓度依次为1mg/ml、0.5mg/ml、0.5mg/ml,对照组牛同期注射矿物油与生理盐水混合佐剂,每个月均做同样处理,加强免疫后8天,每月均采用FSH四日递减法超数排卵处理,隔12小时输精两次,在输精后第7天进行收集胚胎。免疫牛在超排后的发情时间发生得比对照组要早(P<0.05),而且IHN组三次超排总平均可移植胚胎数和A级胚胎分别为6.1±0.6枚、5.0±0.2枚,显著高于对照组的3.7±0.4枚、1.7±0.2枚(P<0.05),IHN+FSP组总平均可移植胚胎数和A级胚胎分别是5.4±0.9枚、4.3±0.7枚,和对照组比差异显著(P<0.05),与IHN组差异不显著(P>0.05)。在可移植胚胎中,三次IHN组A级胚胎占头均获卵总数的总平均数53.3±5.2%要高于IHN+FSP组44.8±3.6%,与对照组的18.0±2.3%相比,差异显著(P<0.05)。在A级胚胎占可移植胚胎的比例中IHN组的总平均数82.8±4.3%与IHN和FSP联合免疫组的80.6±2.0%差异不明显,但与对照组的47.4±6.0%差异显著(P<0.05)。以上结果说明:主动免疫IHN和FSP能连续促进卵泡发育、提高卵巢对超排的反应,不仅可以提高胚胎数量,也可以提高胚胎的质量。
第二部分工作主要是进行水牛生长分化因子9(GDF9)的全基因克隆以及其成熟肽的原核表达,先将水牛GDF9成熟肽的cDNA序列插入原核表达质粒pRSETA,并将重组质粒pR-GDF9转入大肠杆菌Ecoli.BL21(DE3)中经IPTG诱导表达理论相对分子量为19.2KD的融合蛋白。该蛋白包含质粒本身的36个氨基酸残基,以及目的片段132个氨基酸残基。该GDF9重组蛋白可用于今后免疫动物提高超排数和产仔数的研究,以及免疫动物后收获抗GDF9抗体用于调控卵子的体外和胚胎体外发育和生产研究。
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