模拟微重力促进人牙髓干细胞增殖和黏附能力机制研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leolee
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目的:探究模拟微重力(simulated microgravity, SMG)促进接种于聚乙醇酸-聚羟基乙酸共聚物(poly-lactic-co-glycolic acid, PLGA)支架上的人牙髓干细胞(humanDental Pulp Stem Cells,hDPSCs)黏附和增殖能力的机制。  方法:将含1×106个生长状态良好的第5代人牙髓干细胞的细胞悬液接种在无菌处理的3×3×3mm3 PLGA三维支架上,随机分成两组,分别在模拟微重力下(实验组)和普通重力下(对照组)培养72小时。①采用MTT法检测普通重力和模拟微重力中人牙髓干细胞在PLGA支架上的细胞增殖能力;流式细胞术及Western Blot检测人牙髓干细胞在PLGA支架上培养72小时后的细胞周期分布及细胞周期蛋白CyclinA,Cyclin E、细胞周期依赖性激酶Cdk2、细胞周期依赖性激酶抑制因子p21和p27的蛋白表达变化。②采用黏附实验、DAPI荧光染色以及Real time PCR array检测细胞黏附能力以及84种细胞外基质及黏附分子mRNA的变化。实验结束后数据用SPSS13.0统计软件处理,采用独立样本t检验,以P<0.05为有统计学差异。  结果:①a、MTT显示模拟微重力组的OD值均高于普通重力培养组;b、细胞周期分析结果表明模拟微重力组中S期细胞比例明显高于普通重力培养组,且大量细胞处于G2/M期;c、模拟微重力组中Cyclin A,Cyclin E和Cdk2蛋白表达水平升高,p21和p27的蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义。②a、DAPI荧光染色发现,模拟微重力组中黏附在PLGA支架上的细胞数量较普通重力组明显增多;b、黏附实验发现,模拟微重力组中黏附在纤连蛋白包被的培养皿皿底的细胞明显多于普通重力组;c、Real time PCR array结果显示模拟微重力下84种细胞外基质及黏附分子中有5种基因(ITGA6,ITGAV, ITGB1,LAMB1,TNC)表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:模拟微重力可以通过改变细胞周期进程促进人牙髓干细胞在PLGA支架上的增殖能力;模拟微重力可以上调整合蛋白的表达水平促进人牙髓干细胞的黏附能力。
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