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目的:利用活体共聚焦激光显微镜,结合分子生物学,免疫组织化学等检测方法研究兔LASIK术后MMP-2和MMP-9与角膜愈合的相关性,基质金属蛋白酶抑制剂是否会影响角膜创伤愈合反应,探讨LASIK术后角膜愈合的机制。方法:1、40只新西兰白兔双眼行LASIK治疗,分别于术后实验组左眼给予GM6001(200μg/ml)治疗,1次/日,结膜下注射0.5ml;对照组右眼给予药物基质液治疗,1次/日,结膜下注射方法同实验组,共治疗30天。2、于术前行活体共聚焦激光显微镜检查,并记录兔角膜基质细胞数,内皮细胞数。分别于术后1天、3天、7天、1月、3月进行活体共聚焦激光显微镜检查,并记录角膜基质细胞数,碎片数和内皮细胞数。于术后1天、3天、7天、1月、3月随机抽取8只实验动物,处死后取角膜,使用ELISA检测MMP-2,MMP-9的含量,明胶酶谱法检测角膜MMP-2,MMP-9的活性,免疫荧光法检测术后1月和3月MMP-2在角膜中表达的位置。结果:1、活体共聚焦激光显微镜检查结果:LASIK术后,兔角膜基质细胞数目减少,基质细胞的减少值在术后1天、3天、7天、1月、3月各时间点实验组均小于对照组,差异有统计学意义(F=4.511,P＜0.05)。术后兔角膜基质层出现大量碎片,碎片数在术后1天、3天、7天、1月、3月各时间点实验组均小于对照组,差异有统计学意义(F=5.001,P＜0.05)。术后兔角膜内皮细胞数目变化值在术后1天、3天、7天、1月、3月各时间点实验组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05)。2、ELISA结果显示:术后不同时间点MMP-2的含量实验组均小于对照组,差异有统计学意义(F=4.171,P＜0.05).MMP-2的含量与基质细胞减少值和碎片数分别具有相关性(r=0.65,P＜0.05;r=0.58,P＜0.05).术后不同时间点MMP-9的含量实验组均小于对照组,差异有统计学意义(F=5.508,P＜0.05).MMP-9的含量与基质细胞减少值和碎片数分别具有相关性(r=0.42,P＜0.05;r=0.31,P＜0.05).3、明胶酶谱分析结果:术后不同时间点MMP-2的活性实验组均小于对照组,差异有统计学意义(F=4.012,P＜0.05)。MMP-2的活性与基质细胞减少值和碎片数分别具有相关性(r=0.58,P＜0.05;r=0.52,P＜0.05).术后不同时间点MMP-9的活性实验组均小于对照组,差异有统计学意义(F=3.822,P＜0.05)。MMP-9的活性与基质细胞减少值和碎片数分别具有相关性(r=0.39,P＜0.05;r=0.28,P＜0.05)。4、免疫荧光观察结果:LASIK术后1,3个月对照组仍可见MMP-2在角膜上皮层和基质层表达,实验组仅在角膜上皮层可见。结论:1、MMP-2和MMP-9与LASIK术后基质细胞减少值,基质层碎片数呈正相关,MMP-2和MMP-9可能起到抑制角膜愈合的作用。2、基质金属蛋白酶抑制剂GM6001可以抑制LASIK术后MMP-2和MMP-9的表达和活性,从而促进角膜愈合。