毕赤酵母表达猪γ干扰素及其抗病毒生物学活性的研究

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为了在中国研制生物工程重组猪干扰素类制剂,防制猪病毒性传染病和进一步开展猪干扰素的分子生物学研究,该研究率先利用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对猪γ-干扰素进行了表达.1.利用PCR技术成功亚克隆了PoIFN-γ<,2>基因序列,并插入酵母表达载体Phil-S1,将其准确置于PHO1分泌信号肽之后构建获得了正确的重组表达质粒pHIL-S1/PoIFN-γ<,2>.2.采用电激转化法将重组表达质粒pHIL-S1/PoIFN-γ导入毕赤酵母GS115/His<->株,并筛选出阳性基因工程酵母菌32株.然后挑选4株以甲醇作诱导物成功地进行了表达,并获得了分子量为18KD的糖基化蛋白产物.3.猪重组γ-干扰素(rPoIFN-γ<,2>)抗病毒试验结果表明其抗病毒活性为450~540units/ml.4.该研究构建的毕赤酵母表达系统为规模化高密度生产猪重组γ干扰素奠定了基础.
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