目的：通过运用现代化分析化学手段,测定不同蒸制时间的制佛手样品和不同干燥方法干燥的佛手饮片中的主要化学成分,同时结合其抗氧化能力的变化规律,采用统计学方法探讨蒸制时间与佛手中化学成分含量变化的相关关系,分析探讨其炮制机理,并比较分析确定较佳蒸制时间及较佳干燥工艺；运用现代化分析化学手段及中药指纹图谱技术对不同批次的制佛手饮片进行检测,建立全面、可行的制佛手的质量控制方法及指纹图谱,为制佛手的综合开发利用提供方法学参考。方法：1蒸制工艺的研究运用紫外-可见分光光度法,以橙皮苷为对照品,对不同蒸制时间的佛手样品中的总黄酮进行含量测定；运用HPLC法,以橙皮苷、5,7-二甲氧基香豆素为对照品,对不同蒸制时间的佛手样品中进行含量测定,比较分析。2炮制机理的初步研究运用紫外-可见分光光度法,对不同蒸制时间的佛手样品的褐变度(A420nm值)进行测定；采用茚三酮显色,以谷氨酸为对照品,对不同蒸制时间的佛手样品中的总氨基酸进行含量测定；采用3,4-二硝基水杨酸显色和苯酚-浓硫酸显色,以葡萄糖为对照品,对不同蒸制时间的佛手样品中的还原糖和总糖进行含量测定；运用HPLC法,以5-羟甲基糠醛为对照品,对不同蒸制时间的佛手样品中进行含量测定,比较分析。3抗氧化能力的测定及相关性分析以抗坏血酸为阳性对照药物,体外清除DPPH自由基能力为指标,测定不同蒸制时间佛手的抗氧化活性。采用SPSS17.0统计分析软件,对蒸制时间与各检测成分之间的相关性进行研究。4干燥工艺的研究采用智能式常温厢式干燥机RTI-1(低温低湿)、恒温干燥及晒干等技术方法,对佛手饮片干燥工艺进行比较研究。运用HPLC法,以橙皮苷为对照品,对不同干燥方法工艺的佛手样品中进行含量测定；测定其复水率,结合外观性状,比较分析,筛选较佳工艺方法。5质量标准研究参照《中国药典》2010版的外观、理化鉴别、水分、灰分、浸出物和含量测定的规定,对不同批次制佛手样品进行初步评价及鉴别；应用薄层层析法对制佛手乙醇提取物进行薄层分析,并采用两种不同极性的展开系统展开,观察其薄层行为,建立其TLC特征图谱。应用HPLC法对不同批次制佛手中橙皮苷、5,7-二甲氧基香豆素和5-羟甲基糠醛含量进行测定。运用HPLC-PDA法对佛手饮片甲醇提取物进行全波长扫描,确定基线稳定,提供信息量比较丰富的检测波长,以橙皮苷作为参照峰,建立不同批次制佛手指纹图谱,获得共有峰信息,并运用“中药指纹图谱相似度评价系统2004A版”对共有峰信息进行相似度分析。结果：1蒸制工艺的研究样品中总黄酮的含量的变化规律是先增加后降低,其中蒸制2.5个小时的制佛手样品中总黄酮含量最高,为50.682mg/g；蒸制4个小时的制佛手样品中总黄酮含量最低,为29.228mg/g,生品中总黄酮含量为29.355mg/g,蒸制2.5个小时的制佛手总黄酮含量比生品约增加了一倍。不同蒸制时间的制佛手样品中橙皮苷含量存在差异,其中蒸制2.5h的样品含量最高,为1.038mg/g；不同蒸制时间的制佛手样品的5,7-二甲氧基香豆素含量存在差异,且炮制前后含量差别较大,生品含量最高为2.195mg/g,蒸2.5h的样品次之,为1.628mg/g。2炮制机理的初步研究不同蒸制时间的样品颜色存在较大的差异。随着时间的延长,其饮片的颜色越来越深,褐变度(A420nnm值)越来越大,炮制前后颜色差异较大,其中褐变度(A20nm值)最大的是蒸制4个小时的制佛手(样品9),为0.671,而生佛手(样品1)褐变度(A420nm值)为0.090,几乎检测不到。炮制后,样品中的氨基酸含量有所减少,且随着蒸制时间的延长,样品中总氨基酸的含量逐渐降低。其中生品(样品1)总氨基酸的含量为27.376mg/g,蒸制4小时的制佛手(样品9)为16.863mg/g,含量减少了接近一半。炮制后还原糖和总糖的含量均有所增加,但随着蒸制时间的延长,还原糖含量变化并未见明显的规律,而总糖的含量变化规律为先增加后稳定。其中生品(样品1)总糖的含量为33.18%,而当蒸制时间在2个小时后,随着蒸制时间延长,总糖含量保持在56%-60%之间上下轻微波动。不同蒸制时间的样品中5-羟甲基糠醛含量存在较大差异。炮制前后,含量变化较大,其中生品(样品1)含量为0.0106mg/g,几乎检测不到,随着蒸制时间的延长,其含量逐渐增加,蒸制4个小时的制佛手(样品9)其含量为0.5203mg/g,比炮之前增加了50倍多。3抗氧化能力的测定及相关性分析佛手炮制前后的水提液与醇提液对DPPH自由基均有不同程度的抑制作用,且两者之间存在明显差异,水提取液的抑制作用较高。随着蒸制时间的增加,样品的IC5o值的规律大致为先降低后增加,即抗氧化能力先增大后降低,其中IC50最小(即抗氧化能力最强)的均为蒸制2.5个小时的制佛手(样品6),为0.20mg/ml和2.39mg/ml, IC50最大(即抗氧化能力最弱)水提取液为生品(样品1),为0.72mg/ml,醇提取液的为蒸制4个小时的制佛手(样品9),为5.47mg/ml,其中生品(样品1)醇提取的IC50值与样品9相差甚小,为5.35mg/ml。不同蒸制时间与样品水提取液的IC50值、A420nm值、总氨基酸含量、总糖含量和5-羟甲基糠醛含量均有统计学意义(P<0.05),相关系数分别为-0.915、0.983、-0.885、0.671、0.921；水提取液的IC50值与A420nm值、总氨基酸含量、总糖含量和5-羟甲基糠醛含量均有统计学意义(P<0.05),相关系数分别为-0.880、0.847、-0.710、-0.717；醇提取液的IC50值与总黄酮和橙皮苷含量均有统计学意义(P<0.05),相关系数分别为-0.891和-0.702,总黄酮和橙皮苷含量与醇提取液的IC50值呈负相关关系,它们含量越高,IC50值越小,即抗氧化能力越强；A420nm值与蒸制时间、总氨基酸和5-羟甲基糠醛含量均有统计学意义(P<0.05),相关系数分别为0.983、-0.820和0.950。4干燥工艺研究与其他干燥方法相比,采用智能式常温厢式干燥机RTI-1干燥的佛手样品耗时最短,外观质量最佳,色白香气浓郁,橙皮苷含量最高,产品复水比最大。5质量标准研究制佛手饮片为类椭圆形或卵圆形薄片,常皱缩或卷曲,大小不一。上端有数手指形的分裂,下端近圆形,基部略窄,有的可见果梗痕。长5-10cm,宽3-5cm。质硬而脆,受潮后柔软。气淡香,色棕褐色或棕黑色。建立制佛手的薄层分析方法,取制佛手饮片粉末1.0g,加乙醇10ml,超声20min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇0.5ml使溶解,作为样品溶液。分别点于同一块硅胶G薄层板上,以环己烷：乙酸乙酯(1.5：1)展开系统,薄层图谱显示斑点清晰,分离度良好,信息量丰富。所有测试样品的水分含量9.19%～12.84%,所有测试样品的总灰分为3.14%～9.71%,所有测试样品的水溶性浸出物：冷浸法结果为42.48～60.65%；水溶性浸出物：热浸法结果为54.23～74.33%；醇溶性浸出物：用乙醇作溶剂,冷浸法结果为4.07～20.29%,醇溶性浸出物：用乙醇作溶剂,热浸法结果为22.90～50.30%。14批制佛手样品中橙皮苷、5,7-二甲氧基香豆素和5-羟甲基糠醛的含量存在较大差异。橙皮苷含量在0.142～0.788mg/g之间,均值为0.364mg/g;5,7-二甲氧基香豆素含量在0.642-1.747mg/g之间,均值为1.038mg/g；5-羟甲基糠醛的含量在0.028-0.901mg/g之间,均值为0.238mg/g。14批制佛手HPLC指纹图谱共有峰有12个,各批图谱与生成的对照图谱R的相似度在0.044-0.930之间,表明14批制佛手的化学成分存在量上的明显差异。结论：1蒸制工艺的研究蒸制能在一定程度上增加了总黄酮及橙皮苷的含量,并且以蒸制时间为2.5小时的制佛手样品中含量最高；对5,7-二甲氧基香豆素含量影响较大,会造成其含量的降低,比较实验选用的蒸制时间,以2.5小时为最高。综合以上考察指标结果,初步认为2.5小时为最佳的蒸制时间。2炮制机理的初步研究蒸制后,佛手总黄酮及橙皮苷含量增加,而5,7-二甲氧基香豆素含量降低。同时,在此过程中,佛手发生了美拉德反应,生成类黑精发生聚合反应形成了复杂的高分子色素,A42onm值增大,造成了佛手颜色的加深；氨基酸降解；产生了5-羟甲基糠醛。3抗氧化能力测定及相关性分析炮制前后,样品的抗氧化能力出现较大的差异,蒸制能够使其抗氧化能力增大,且蒸制2.5个小时的制佛手的抗氧化能力是所有炮制品中最强的。因此,可以认为2.5小时是最佳的蒸制时间。蒸制时间对水提取液的IC50值、A420nm值、总氨基酸含量、总糖含量和5-羟甲基糠醛含量影响较大；总氨基酸含量、总糖含量和5-羟甲基糠醛含量直接影响水提液的抗氧化能力；总黄酮和橙皮苷含量越高,醇提液抗氧化能力越强；随着蒸制时间的延长,氨基酸发生水解转化,5-羟甲基糠醛累积,A420nm值变大,即颜色加深。证明了在炮制过程中,制佛手饮片发生了美拉德反应。4干燥工艺的研究与其他常规干燥方法比较,采用智能式常温厢式干燥机RTI-1干燥的佛手质量最好,因此,该方法应予以大力推广。5质量标准按国家药典委员会的要求初步拟定,制佛手饮片的含水量不得过13.0%。按国家药典委员会的要求初步拟定,制佛手饮片总灰分不得过10.0%。按国家药典委员会的要求初步拟定,制佛手饮片浸出物：热浸法,水溶性出物不得少于45.0%；热浸法,用乙醇作溶剂,醇溶性出物不得少于15.0%。按国家药典委员会的要求初步拟定,按干燥品计算,含橙皮苷(C28H34015)不得少于0.030%。按国家药典委员会的要求初步拟定,按干燥品计算,含5,7-二甲氧基香豆素(C11H10O4)不得少于0.50%。