目的:探讨利用无血清培养基从恶性黑色素瘤细胞中分离出恶性黑色素瘤干细胞的可行性,然后再研究恶性黑色素瘤干细胞的生物学特性。方法:将恶性黑色素瘤细胞系A375细胞接种于含b FGF、B27、EGF的无血清培养基中,观察其生长增殖过程,利用无血清培养基获得球体细胞,将其与普通黑色素瘤细胞分别注射入BALB/c小鼠体内比较它们的致瘤性,将获得的瘤体行免疫组化,检测肿瘤干细胞表面标记物CD20、CD133的表达情况,将获得的球体细胞和普通肿瘤细胞分别加入Transwell小室内比较它们的迁移能力,通过免疫荧光检测其肿瘤干细胞表面标记物CD20、CD133的表达情况。结果:采用无血清培养基可以获得球体细胞,球体细胞致瘤性、迁移能力强于普通贴壁细胞,肿瘤组织可检测到CD20、CD133的表达,球体细胞中CD20、CD133的表达明显高于普通贴壁细胞。结论:恶性黑色素瘤存在肿瘤干细胞,无血清培养的球体细胞可以富集肿瘤干细胞,肿瘤干细胞具有很强的致瘤性、转移能力,球体细胞表达肿瘤干细胞标记物。