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[目的]研究表明冠心病(CHD)的危险程度并非完全取决于动脉粥样硬化斑块的大小,抑或是冠脉狭窄的严重程度。而与冠脉粥样硬化斑块的构成,是否稳定,以及有无继发血栓、血栓栓塞等密切相关。其中粥样硬化斑块的不稳定和易损性,又系多因素综合作用的结果,研究显示细胞外基质金属蛋白酶(MMPs)在粥样斑块易损性中扮演重要的角色。我们课题组前期已经在MMPs的共同上游分子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN,又称CD147)参与调节动脉粥样硬化(AS)的形成及易损斑块(VP)的破裂上做了大量的研究工作。本研究旨在探讨和证实EMMPRIN能否可以通过TLR4信号通路介导人THP-1巨噬细胞中MMPs以及IL-6、IL-8、MCP-1等动脉粥样硬化炎症相关因子的表达。有望靶向稳定动脉粥样硬化易损斑块,进而为冠心病的综合防治提供新的实验基础和理论依据。[方法]1.人THP-1单核细胞(THP-1急性单核细胞白血病细胞)一株,(购自中国科学院上海细胞库),按要求进行细胞培养及传代。使用丙二醇甲醚醋酸酯(佛波醋,PMA)(100ng/ml)对悬浮的THP-1单核细胞进行诱导,使之分化为贴壁的THP-1巨噬细胞。2.EMMPRIN刺激THP-1巨噬细胞时间长短与毒性大小:CCK-8试剂盒检测提示EMMPRIN刺激THP-1巨噬细胞5-8小时OD值呈相对平缓的“平台期”,细胞毒性相对较小;而9～10小时OD值下降显著,提示细胞毒性明显增加。3.实验共分三组:空白对照组(THP-1巨噬细胞)、EMMPRIN刺激组(THP-1巨噬细胞+EMMPRIN刺激6h)、TAK-242抑制组(THP-1巨噬细胞+TAK-242抑制4h,4h后PBS清洗3次,再加EMMPRIN刺激6h)。4.基因和蛋白水平上的功能试验:①.分别收集三个实验组细胞,进行RNA提取、cDNA逆转,通过qRT-PCR实验对MMP3、MMP7、MMP9以及MMP14浓度的测定。②.分别收集三个实验组细胞,提取蛋白,通过Western blotting实验检测MMP 9、MMP14以及TLR4蛋白的浓度。③.分别收集各实验组细胞上清,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清中动脉粥样硬化相关炎症因子IL-6、IL-8以及MCP-1的表达。[结果]1.人THP-1巨噬细胞建模成功:应用PMA(100 ng/ml)刺激人THP-1单核细胞48h,观察到原本悬浮、圆形的细胞,呈贴壁、梭型或椭圆形改变,且细胞体积增大,伸出不规则伪足;标志着人THP-1单核细胞已成功分化为THP-1巨噬细胞,提示建模成功。2.EMMPRIN细胞毒性的检测:通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测出EMMPRIN刺激THP-1巨噬细胞5-8小时细胞毒性相对较小,而9～10小时后细胞毒性明显增加。3.MMP3、MMP7、MMP9以及MMP14基因水平的表达:与空白对照组相比,EMMPRIN刺激组的MMP7、MMP9和MMP14基因表达量明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);而MMP3基因未出明显上调表达,无统计学意义(P>0.05)。与EMMPRIN刺激组相比,TAK-242抑制组MMP9和MMP14基因表达量下降(P<0.05),MMP7的基因水平未出现明显下调表达(P>0.05)。4.MMP9、MMP14和TLR4蛋白水平的表达:与空白对照组相比,EMMPRIN刺激组的MMP9、MMP14和TLR4蛋白水平出现了明显的升高(P<0.05)。而与EMMPRIN刺激组相比,TAK-242抑制组MMP9、MMP14和TLR4蛋白表达量出现了明显下降(P<0.05)。另外与空白对照组相比,TAK-242抑制组中TLR4蛋白被明显抑制(P<0.05)。5.IL-6、IL-8及MCP-1炎症因子的表达:与空白对照组相比,EMMPRIN刺激组IL-6、IL-8及MCP-1明显上升(P<0.05);而与EMMPRIN刺激组相比,TAK-242抑制组的IL-6、IL-8及MCP-1被明显抑制(P<0.05)。[结论]1.EMMPRIN可以显著上调MMP9、MMP14以及炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1的表达。2.抑制TLR4信号通路,可以明显下调MMP9、MMP14以及炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1的表达,有望为增加斑块的稳定性,靶向阻断易损斑块提供理论依据。