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背景:增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是一个有多种细胞和细胞因子参与的一种眼内创伤修复反应,RPE(retinal pigment epithelium,RPE)是其中主要的增殖细胞,并且RPE的移行被认为是PVR的起始阶段。PVR的手术复杂而费时,寻找有效的辅助药物,抑制RPE的活性,对防止和降低PVR的发生具有重要的临床意义。 目的:(1)观察新生小牛血清(FBS),血小板源性生长因子(PDGF)和白细胞介素—1β(IL—1β)对体外培养的人RPE增殖的作用,以及细胞因子拮抗剂舒拉明(suramin)对上述因素的影响:(2)观察FBS,PDGF和IL-1对RPE移行的作用和舒拉明对这种作用的影响。 方法:(1)在培养的人RPE培养液中分别加入10%FBS、PDGF(10μg/L)和IL—1β(10μg/L),分别在培养1、2、3、4和5d时,进行四甲基偶氮唑盐比色法(MTT),动态观察细胞增殖状况;制备第3d时的细胞铺片,进行HE染色和AgNORs染色,计数细胞分裂指数及细胞核AgNORs数,观察细胞有丝分裂的旺盛程度。并同时在培养液中加入舒拉明(1.5,15,150和250mg/L),应用相同方法观察舒拉明对在上述因素作用下RPE增殖的作用;(2)在近融合状态单层细胞中,制造RPE损伤愈合模型,在培养液中分别加入10%FBS、PDGF(10μg/L)和IL—lβ(10μg/L),培养20h后计数进入刮痕区的细胞,观察上述因素对RPE移行的作用。同时另设实验组在培养液中加入舒拉明(1.5,15和150mg/L),观察其对10%FBS、PDGF(10μg/L)和IL—lβ(10μg/L)刺激的RPE移行的影响。 结果:(1)MTT检测发现培养的人RPE在10%FBS、PDGF(10μg/L)和IL—1β(10μg/L)作用下,随时间的增加A值上升,与空白对照组相比有非常显著差异(P〈0.01),3d时分别是对照组的159%,127%和119%。在加入舒拉明后,能够非常显著地抑制10%FBS、PDGF(10μg/L)和IL—1β(10μg/L)的作用(P〈0.01),随药物剂量的增加A值下降,150mg/L3d时对10%FBS、PDGF和IL—1β的抑制率分别为51%,26%和18%;10% 第四军医大学硕士研究生论文 FBS、PDGF和 IL—16作用下,细胞分裂指数及核仁数也明显增加,舒拉明 在150二y卜以下对RPE形态没有明显改变,但显著抑制了细胞分裂增殖: 在 250lug/L时对细胞产生了明显的毒性作用。(2)移行实验发现 10%FBS、 叩肝(m陀几)和几一lp(m陀几)可以明显促进mE的移弓(尸<以w), 与空白对照组相比,分别是其的437%、382%和285%。这种作用可以被 舒拉明非常显著抑制(尸<0 01,150mg/L时对 10%FBS、PDGF和 IL—lp 的移行抑制率为 sl%、42%和 46%。 结论:门)血清、PDGF和几习6是使 RPE保持旺盛活力持续增殖的有 效刺激因素,舒拉明可以剂量依赖性地抑制血清、PDGF和 IL习 对细胞的 促增殖作用:Q)血清、POGF和ILl 可增强细胞移行能力,舒拉明可以 剂量依赖性地抑制血清、PDGF和IL刁 对细胞的促移行作用;()血清、 PDGF和 ILl促进细胞移行的能力较促增殖能力强;u)舒拉明抑制 FBS 的作用强于PDGF和IL*A说明它并非某种单一的细胞因于抑制剂,在细 胞生长中可对多种相关因素起作用。这为临床预防和治疗PVR提供了新 思路,舒拉明可能会成为临床防治PVR的一种安全有效的新药。相关研究 国内未见报道。