【摘 要】
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目的:筛选和鉴定与系统性红斑狼疮(systernic lupus erythematosus,SLE)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义。
方法:
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目的:筛选和鉴定与系统性红斑狼疮(systernic lupus erythematosus,SLE)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义。
方法:分别选取正常人、SLE和RA患者血清各30例,先用正常人混合血清对噬菌体随机7肽库进行筛选,再分别用SLE和RA患者混合血清作为筛选配基,对未与正常人混合血清反应的噬菌体随机7肽进行亲和筛选、扩增,获得特异性结合的噬菌体克隆。分别用SLE及RA患者混合血清进行Dot-ELISA实验鉴定SLE和RA获得的噬菌体克隆,之后用SLE及RA患者血清各12例进一步鉴定其阳性噬菌体的混合克隆,12例正常人血清作为对照组,确定阳性噬菌体克隆与个体血清之间的结合情况;并对最终鉴定的噬菌体克隆进行测序与比对分析。
结果:筛选到与SLE患者混合血清特异性结合的12个阳性克隆及与RA患者混合血清特异性结合的17个阳性克隆;将上述SLE的12个阳性克隆混合,分别与SLE患者和正常人的个体血清反应,显示12例SLE患者个体血清均呈现阳性结果,12例正常人个体血清均未出现阳性结果;RA的17个阳性克隆混合后分别与RA患者和正常人的个体血清反应,显示12例RA患者个体血清均呈现阳性结果,12例正常人个体血清均未出现阳性结果。序列分析显示SLE的阳性噬菌体克隆的抗原表位之间均没有共有序列,但SLE阳性噬菌体克隆的抗原表位与杆菌、沙门氏菌、人类免疫缺陷病毒(HIV)等有一定的同源性,而RA阳性噬菌体克隆的抗原表位之间也无共有序列但与杆菌、球菌及人类的某些蛋白等有一定的同源性。
结论:噬菌体随机7肽库筛选出的SLE和RA特异性多肽可能用于制备SLE和RA诊断试剂,同时SLE和RA患者血清中存在与病原体抗原表位结合的抗体成分,提示SLE和RA可能与病原体感染有关。
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