氟尿嘧啶缓释剂对人结直肠癌裸鼠微血管密度的影响及促肿瘤凋亡的机制研究

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目的:观察氟尿嘧啶缓释剂植入对人结肠癌裸鼠移植瘤生长及其对大肠癌中微血管密度(MVD)和生存素(survivin)及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)基因蛋白表达水平的影响,探讨氟尿嘧啶缓释剂抑制大肠癌的效果,阐明其在促肿瘤凋亡方面可能存在机制。方法:用人结直肠癌LoVo细胞株建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,将造模成功的32只(总共34只)裸鼠随机分为4组:PBS尾静脉注射组(A组)、5-FU尾静脉注射组(B组)、5-FU瘤内注射组(C组)、氟尿嘧啶缓释剂植入组(D组)。分别给予相应的药物干预后,记录瘤体体积、瘤重,并用瘤重计算各组抑瘤率,比较各组抑瘤效果,瘤体HE染色,观察其组织病理改变,并免疫组化法检测survivin/caspase-3以及CD31(MVD)表达水平。结果:34只裸鼠有32只在10d左右成瘤,成瘤率94%。各组瘤体体积如下:A组(3672±809)mm~3、B组(2421±466)mm~3、C组1663±693)mm~3、D组(951±500)mm~3,D与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。瘤重:A组(2.88±0.23) g、B组(2.31±0.20)g、C组(1.36±0.26)g、D组(0.51±0.10)g, D与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P<0.05),D组抑瘤率82.3%较之B(19.8%)、C(52.8%)组明显更高。 HE染色结果400倍镜下: A组瘤细胞腺管形成、散在少量凋亡、有片状坏死;B组肿瘤细胞异型性明显,恶性程度高,腺管状结构不明显,小区肿瘤细胞有小片凋亡,有小片出血坏死;C组肿瘤细胞异型性明显,腺管样结果不明显,小区肿瘤细胞片状凋亡,见出血坏死灶;D组肿瘤细胞异型性不明显,腺管状结构不明显,小区肿瘤细胞凋亡明显,仅有少量坏死。100倍镜下:A组肿瘤组织侵袭到脂肪、肌层组织;B组肿瘤组织有局部侵袭到脂肪组织;C组肿瘤边界清楚,未见明显侵袭;D组肿瘤组织边界清晰,未见侵袭脂肪及肌层组织。各组survivin的表达分别是:A(51.50±20.09)%,B(36.63±13.61)%,C(31.63±11.81)%,D(17.00±8.26)%,其表达是呈现逐渐下降趋势,经统计学分析D组跟A、B、C组间比较差异具有统计学意义,P<0.05;各组caspase-3的表达如下:A(6.75±1.67)%,B(21.13±3.68)%,C(48.5±6.61)%,D(72.88±.52)%,其表达呈现逐渐上升的趋势,经统计学分析,D组跟A、B、C组间比较差异具有统计学意义,P<0.05;各组通过CD31计算的MVD值如下:A(51.88±5.06)%,B(43.13±8.18)%,C(39.50±4.54)%,D(26.50±4.53)%,经统计学分析,D组跟A、B、C组间比较差异具有统计学意义,P<0.05。Survivin及caspase-3相关性分析:随着survivin表达的降低caspase-3呈现升高趋势(r=-0.653,p=0.000);Survivin及MVD的相关性分析:随着survivin表达的升高,MVD呈现升高趋势,经相关性分析得(r=0.624,p=0.000)结论:氟尿嘧啶缓释剂植入对裸鼠结直肠癌移植瘤具有确切的抑制生长效果,其在促结直肠癌凋亡方面可能存在的机制之一是通过上调caspase-3的表达,下调survivin的表达来实现的,其下调survivin的表达,可以使肿瘤的血管生成障碍,干扰肿瘤的血运,从而抑制肿瘤的生长,其对肿瘤细胞的有效杀伤为临床实践提供了理论指导,其在肿瘤凋亡方面的作用机制,可为临床大肠癌的治疗提供新靶点、新思路。
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