副溶血弧菌是一种革兰氏阴性细菌，主要分布于世界各地方的海洋和江河湖泊中，主要通过水产品和伤口等途径感染人类和水生生物，导致人和水生动物发生疾病。不耐热溶血毒素TLH是副溶血弧菌的一个重要溶血素，能够溶解人和动物的红细胞，但到目前为止，关于TLH的报道甚少，其生物学机制仍没被阐述清楚。本研究以副溶血弧菌TLH蛋白为研究的出发点，对TLH进行初步的功能研究，通过噬菌体展示技术淘选获得抗TLH的特异性基因工程单链抗体，以研究单链抗体对TLH生物学功能的影响。本研究的主要内容和结果如下：通过PCR扩增了tlh基因，构建了4个不同融合形式的重组表达载体，利用Ni2+亲和层析纯化得到TLH蛋白。用纯化的TLH蛋白作为抗原进行处理3种不同类型的细胞(Hela, Changliver和Raw264.7)，MTT结果显示，TLH抗原能够对细胞产生明显的细胞毒性效应，并具有一定的蛋白浓度和处理时间依赖性。TLH对三种细胞的半致死剂量分别为4.25、4.75和3.99μg/mL，同时，用纯化的TLH免疫Balb/c小鼠，获得了血清效价为16000的抗血清。以免疫的小鼠脾脏提取的总RNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成了cDNA第一链。利用合成的简并引物PCR扩增得到了抗体分子的VH和VL基因，通过Linker-DNA将VH和VL分子连接起来，PCR组装扩增出scFv分子。构建了库容量为1010的噬菌体抗体初库，通过固相淘选方式成功淘选得到了1株高亲和力的单链抗体LA3-scFv。BLAST序列分析结果表明，LA3-scFv是一个鼠源抗体基因。重链的基因排列方式为V-J-D，轻链的基因排列方式为V-J。转化大肠杆菌HB2151并使用IPTG诱导表达了可溶性的scFv蛋白，ELISA和Westernblotting结果表明：LA3-scFv能特异性识别TLH，不与其他抗原分子(BSA, KLH,YscF, Vp1668)发生交叉反应。将制备的噬菌体单链抗体和天然条件下纯化的TLH抗原同时处理3种细胞，MTT检测结果显示，噬菌体单链抗体能够有效抑制TLH对细胞的毒害效应，并对宿主细胞产生保护作用。通过FACS方法进一步测定噬菌体抗体对TLH的中和抑制，获得了与MTT相似的实验结果。此外，本研究成功的构建了4种不同表达形式的原核表达载体，在大肠杆菌BL21中实现了scFv蛋白分子的高效表达。采用低温诱导表达，通过亲和层析成功的纯化出四种不同表达形式scFv蛋白，并通过ELISA方法测定了纯化的scFv的抗原结合力，结果证明分子伴侣Skp共表达的scFv具有最强的抗原结合活性。ELISA检测结果发现skp共表达的scFv能够特异性识别抗原TLH，而与其他相关抗原分子没有发生交叉反应。采用等温热量法测定Skp共表达的scFv的亲和力，抗体分子的亲和力可以到达108L/mol。