研究miR-20a对肺泡上皮细胞A549合成肺表面活性物质的影响及其可能的作用机制。
方法将成功构建的miR-20a过表达慢病毒载体(miR-20a组)与空载慢病毒(空载组)分别转染A549细胞，通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定转染效率；采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况；生物信息学方法预测miR-20a促进肺发育的潜在相关靶基因；实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-20a、肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)、肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)、肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)和肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D) mRNA的表达；免疫印迹法检测SP-A、SP-B、SP-C、SP-D及信号转导及转录活化因子3(STAT3)蛋白水平。
结果通过绿色荧光表达观察到慢病毒成功转染入A549细胞，RT-PCR提示转染miR-20a过表达慢病毒载体后miR-20a的表达(3.85±0.18)较正常组(0.99±0.04)及空载组(1.21±0.12)显著增高，差异均有统计学意义(t＝10.85、9.64，均P<0.001)，细胞株成功建立。与正常组(24 h、48 h、72 h：0.23±0.01、0.39±0.01、0.56±0.03)及空载组(24 h、48 h、72 h：0.25±0.01、0.44±0.05、0.59±0.01)比较，miR-20a对不同时间的A549细胞增殖(24 h、48 h、72 h：0.26±0.01、0.41±0.02、0.58±0.02)无影响，差异均无统计学意义(均P>0.05)。在线软件预测发现STAT3基因很可能是miR-20a的靶基因。与正常组(1.00±0.05、1.24±0.20、1.31±0.09、0.89±0.12)及空载组(0.76±0.10、1.31±0.13、1.50±0.11、1.01±0.11)比较，miR-20a可上调SP-A、SP-B、SP-C和SP-D mRNA的表达(2.05±0.17、2.14±0.10、2.84±0.09、1.66±0.08)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常组(0.46±0.01、0.27±0.03、0.69±0.01、0.43±0.01)及空载组(0.43±0.01、0.21±0.01、0.79±0.02、0.44±0.02)比较，miR-20a也可上调SP-A、SP-B、SP-C和SP-D蛋白的表达(0.55±0.01、0.47±0.05、0.96±0.02、0.59±0.03)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。。与正常组(0.60±0.04)及空载组(0.68±0.06)比较，miR-20a组STAT3表达水平(0.37±0.05)显著降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论STAT3是miR-20a的靶基因，miR-20a很可能通过抑制STAT3表达来促进A549细胞合成肺表面活性物质。