【摘 要】
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从鲜牛奶中分离到1株产β-galactosidase的细菌,经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillus sp. K1.提取该菌株的染色体DNA,以pUC18(lac-)为载体,构建其DNA文库;在含有X
【机 构】
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山东大学微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250100
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从鲜牛奶中分离到1株产β-galactosidase的细菌,经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillus sp. K1.提取该菌株的染色体DNA,以pUC18(lac-)为载体,构建其DNA文库;在含有X- gal的LB平板上筛选该文库,得到6个蓝色菌落;对阳性克隆中插入的DNA片段序列测定,鉴定出1个编码全长为2028bp并携带有组成型启动子的β-半乳糖苷酶基因.将该基因导入大肠杆菌BL21(DE3)中,实现了β-半乳糖苷酶高效表达,其酶活为25.06U/mL,高于原始菌株的4.55U/mL,并进一步用亲和层析将该酶进行了纯化.
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