【摘 要】
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采用体积色谱法对由E.coli表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)复性与同时纯化工艺进行了研究。分别讨论了不同浓度的脲、流动相pH以及在流动相中添加不同比
【机 构】
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咸阳师范学院化学系; 西北大学现代分离科学研究所; 西北大学现代分离科学研究所 陕西咸阳712000; 陕西咸阳712000; 陕西西安710069;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(20175016)
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采用体积色谱法对由E.coli表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)复性与同时纯化工艺进行了研究。分别讨论了不同浓度的脲、流动相pH以及在流动相中添加不同比例的GSSG/GSH对rhGM-CSF复性与同时纯化的影响。结果表明:三者对其复性效率和质量回收率均有较大的影响,GSSG/GSH可有效提高rhGM-CSF二硫键的正确对接和复性效率,而低浓度的脲则可有效抑制蛋白沉淀,可大大提高质量回收率。在最优化条件下,SEC可在30 min内使rhGM-CSF在分离纯化的同时进行复性,其比活为1.31×107 IU/mg,质量回收率为42.3%,纯度可达到86.4%。
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