表面展示棉铃虫钙粘蛋白基因细胞系的建立

来源 :农业生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:baicaiyunai
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
为研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白与其受体钙粘蛋白的相互作用,本研究利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)囊膜蛋白GP64细胞膜锚定的特点,将172 bp的N端信号肽(GP64 signal peptide,gp64sp)和135 bp的C端膜锚定区域(GP64 C-terminal transmembrane domain,gp64ctd)连接,并在中间添加了一段含有6个酶切位点的序列,再连接到表达载体p IZ/V5-His,成功构建了一个使外源基因在细胞膜上表达的重组载体p IZ/V5-gp64。将扩增的3 882 bp的棉铃虫钙粘蛋白(Helicoverpa armigera cadherin,HaCAD)基因重复区和近膜区片段与重组载体p IZ/V5-gp64进行酶切和连接,构建重组载体p IZ/V5-gp64-HaCAD,将其转染棉铃虫细胞系Ha-E-1,通过筛选、细胞克隆和PCR验证,获得了重组钙粘蛋白基因的转基因细胞系Ha-T-CAD。免疫荧光法检测证实,钙粘蛋白在转基因细胞系Ha-T-CAD中成功表达。Western blot检测发现,在Ha-T-CAD细胞的膜蛋白中有140 k D大小的钙粘蛋白。转基因细胞系Ha-T-CAD的构建将为Bt杀虫晶体蛋白作用机理以及昆虫对Bt毒素的抗性机制研究提供基础资料。 In order to study the interaction between the Bacillus thuringiensis insecticidal crystal protein and its receptor cadherin, we used the membrane protein of Ac MNPV (AcMNPV) The 172 bp N-terminal signal peptide (gp64sp) and the 135 bp C-terminal transmembrane domain (gp64ctd) were ligated with a linker containing 6 A restriction enzyme site, and then ligated into the expression vector pIZ / V5-His. A recombinant vector pIZ / V5-gp64 was successfully constructed to express the foreign gene on the cell membrane. The amplified 3 882 bp repeat region and proximal membrane region of Helicoverpa armigera cadherin (HaCAD) gene were digested and ligated with the recombinant vector pIZ / V5-gp64 to construct the recombinant vector pIZ / V5 -Gp64-HaCAD, which was transfected into the Helicoverpa armigera cell line Ha-E-1. The recombinant cell line Ha-T-CAD of cadherin gene was obtained by screening, cell cloning and PCR. Immunofluorescence assay confirmed that cadherin was successfully expressed in the transgenic cell line Ha-T-CAD. Western blot showed 140 kD-sized cadherin in the membrane proteins of Ha-T-CAD cells. The construction of transgenic cell line Ha-T-CAD will provide the basic data for the mechanism of Bt insecticidal crystal protein and the mechanism of insect resistance to Bt toxin.
其他文献
在实验室培养条件下,研究了不同氮肥用量水平下土壤中分别添加除草剂乙草胺对尿素态氮的水解、硝化及反硝化等氮素转化过程的影响。试验设7个处理,分别为施氮量0、75、150和3
现代舞技巧以开发肢体潜能为主要目标,有别于芭蕾舞或其他固定形式的舞蹈技巧,“惟美”并不是现代舞的训练目标,现代舞讲究的是以肢体语言作为传达喜、怒、哀、乐的工具。自
1999年12月18日由上海市声学学会主持,请韩国世光株式会社(SekwangcoLtd)介绍了一种隔声隔振浮筑结构的新材料——世光消音剂。该型消音剂是利用废弃橡胶轮胎为原料,经清理、
鸡西矿业集团公司张辰煤矿西三采区3
信臣精卒陈利兵而谁何(《过秦论》) 教材注:“而谁何,呵问他是谁,就是缉查盘问的意思”。 “谁何”注为“呵谁”是没有道理的。“谁”是疑问代词,但此句中的疑问代词并非前
九月结束的武汉和成都两大重要赛事,都采用了目前最先进的2.1评分系统。此评分系统以已获得国际奥委会认可的滑冰项目评判系统为标准,提高了记录的客观性,更利于国际奥委会、
20 0 0年 5月 2 4日 ,路易斯安纳州唐纳森维尔 ,在沿密西西比河的 5 5公里窄长工业带的 CF工业公司的 3号氨装置发生爆炸事故 ,造成 1人死亡 ,10人受伤。 2 0分钟后 ,火灾得
钢琴教学要掌握相关教学理论体系、把握教学规律,研究适应形势发展要求的教学方法,因材施教,突出基本功训练,注重情技交融。 Piano teaching should grasp the relevant the
当前,教学改革正在进一步深化,高校声乐教学也紧随其后,找准着眼点,纷纷进行着新一轮的变革。高校声乐教学,能够促使学生掌握艺术技能,是高校教学中一个重要的教学手段。本文
由于现代人普遍工作强度大,又受到家庭、社会、个人等各方面的原因影响,很容易将情绪带入到工作当中,以致于导致职业倦怠的情况出现。正是由于职业倦怠极其容易影响到工作效