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Objectif L’objectif de ce travail est d’etablir une methode d’analyse du polymorphisms de la conformation monochaine (PCMC) , capable de detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHI dans le cancer colique en utilisant l’l ctrophor se capillaire associee a la fluorescence laser-induite (FLJ-EC). Methodes Les exons 12 du gene hMLHl du sang peripherique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains temoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analyse par FLJ-EC. Les echantillons anor-maux ont ete confirmes par sequen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA) , de la temperature de separationcet du voltage de separation sur le comportement de EC ont ete aussi studies. Resultats L’analyse de PCMC par la methode FLJ-EC a retrouve une mutation heterozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a ete objectivee par la sequen age EC de ces echantillons, aucune mutation n’a ete retrouvee chez les 20 sujets sains temoins. La separation des pics d’ADN monochainaux a ete facilitee par une legere augmentation de la concentration de LPA (4%-6% ) , une legere baisse de la temperature de separation (20℃) et une legere elevation du voltage de separation (9kV). Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de separation appropriee et un voltage de separation bien approprie ameliorent considerablement l’efficacite du FLJ-EC. L’application de cette methode pour detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHl est d’une rapidite, d’une efficacite, et d’uneereproductivit consid rabies. Cette methode de realisation facile reste tres prometteur pour le depistage rapide et massive des mutations genetiques.
Objectif L’objectif de ce travail est d’etablir une methode d’analyze du polymorphisms de la conformation monochaine (PCMC), capable de detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHI dans le cancer colique en utilisant l’l ctrophor se capillaire associee la fluorescence laser-induite (FLJ-EC). Methodes Les exons 12 du gene hMLHl du sang peripherique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets saints temoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analyze par FLJ -EC. Les echantillons anor-maux ont ete confirmes par sequence EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA), de la temperature desectionce du du voltage de separation sur le comportement de EC on ete aussi studies. Resultats L’analyze de PCMC par la methode FLJ-EC a retrouve une mutation heterozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A ate objective par la sequence ec de ces echantillons, aucune mutation n’a ete retrouvee chez les 20 sujets sains temoins. La separation des pics d’ADN monochainaux ate facilitee par une legere augmentation de la concentration de LPA (4% -6%), une legere baisse de la temperature deseparation (20 ° C) et une legere elevation du voltage deseparation (9kV ). Conclusion Une concentration adequate LPA, une temperature de separation appropriee et un voltage de separation biennular approprie ameliorent considerablement l’efficacite du FLJ-EC. L’application de cette methode pour detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHl est d’une rapidite , d’une efficacite, et d’uneereproductivit consid rabies. Cette methode de realisation facile reste tres prometteur pour le depistage rapide et massive des genestiques.