水稻悬浮细胞再生及根癌农杆菌介导转化的影响因素(英文)

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jql
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已经成功报道的农杆菌介导的水稻遗传转化多以活力较高的胚性愈伤为材料,很少以水稻悬浮细胞作为受体.另外,利用农杆菌转化多数都是通过浸泡的方式进行侵染.本实验利用滴加浸染法进行农杆菌介导转化水稻悬浮细胞,探讨影响DNA转化效率的因素.研究显示,在转化前,将水稻悬浮细胞在愈伤诱导培养基上培养1~2周,诱导产生直径为2~3mm的微小愈伤组织对转化非常重要.微小愈伤组织大小不应小于2mm;对悬浮细胞短时间培养不但会缩短植株再生时间,而且会提高转化效率.此外,侵染农杆菌的浓度、侵染时间和不同侵染方法也影响T-DNA插入基因组的效率.用1mlA600值为0.5浓度的农杆菌悬液滴加在水稻悬浮细胞诱导的愈伤,培养3d或直到可见农杆菌菌落,此方法可以得到较高转化效率.将再生的潮霉素抗性的转化植株在含有50mg/L潮霉素的分化和生根培养基中筛选得到,并对转化植株gus基因的表达进行PCR检测.结果显示,用A600值为0.5浓度的农杆菌浸泡侵染20min和滴加浸染法,分别得到PCR阳性植株率为70%和92%.
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