【摘 要】
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产油真菌胞质中NADP+依赖型异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase, IDH）能够为脂肪酸合成提供还原力，前期研究表明高山被孢霉的异柠檬酸脱氢酶4（Mortierella alpina isocitrate dehydrogenase4, MaIDH4）对脂质积累有积极的影响。为了深入研究MaIDH4的性质，该文将其在大肠杆菌和毕赤酵母系统中分别进行异源表达并纯化，均成
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金（31901659）；
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产油真菌胞质中NADP+依赖型异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase, IDH）能够为脂肪酸合成提供还原力，前期研究表明高山被孢霉的异柠檬酸脱氢酶4（Mortierella alpina isocitrate dehydrogenase4, MaIDH4）对脂质积累有积极的影响。为了深入研究MaIDH4的性质，该文将其在大肠杆菌和毕赤酵母系统中分别进行异源表达并纯化，均成功获得纯酶，并考察了不同表达系统对酶活性和产量的影响。首先克隆MaIDH4至表达载体pET28a（+）和pPink-HC-3CZHEK构建重组质粒，然后分别转化至Escherichia coli BL21（DE3）和PichiaPinkTM Strain 2进行诱导表达，最后采用镍柱纯化获得携带10×His标签的MaIDH4重组酶，检测纯酶的比活力分别是34.10 U/mg和43.00 U/mg,酶产量分别为10.28 U/L和159.12 U/L。通过纯酶比活力和酶产量分析表明相比于大肠杆菌表达系统，毕赤酵母宿主更适合MaIDH4的异源表达。
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