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[摘要] 目的 建立银翘解毒片中连翘酯苷A的含量测定的方法。 方法 采用高效液相色谱法；Diamonsil（钻石）C18（5μm，250 mm×4.6 mm）色谱柱；流动相：乙腈-0.4%冰醋酸溶液（17︰83）；流速1 mL/min；检测波长330 nm；进样量10 μL，等梯度洗脱，对其进行含量测定。 结果 连翘酯苷A 在10.5～60.3 μg，范围内的线性关系良好（n=6）。 结论 该方法简便、准确，适用于银翘解毒片的质量控制。
[关键词] 银翘解毒片；连翘酯苷A；高效液相色谱法
[中图分类号] R286 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2011）22-114-02
银翘解毒片具有疏风解表，清热解毒功效，用于风热感冒，症见发热头痛、咳嗽口干、咽喉疼痛。由金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗、淡竹叶、甘草等9味药组成，银翘解毒片收载于《中华人民共和国药典》（2010年版）[1]，连翘为木犀科连翘属植物连翘的干燥果实[2]，主要活性成分为以连翘苷为代表的木脂素类及连翘酯苷为代表的苯乙醇苷类 [3]，具有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用，常用连翘治疗急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等症[4]，为银翘解毒片的主要药味；连翘苷和连翘酯苷A为连翘特征成分，对金黄色葡萄球菌等11种致病菌均有极强的抑制作用，并具有抗病毒、抗炎、解热、抗氧化等作用，是迄今为止从连翘中发现的药理活性最强的活性成分之一[5-6]。2010年版药典连翘中增加了测定连翘酯苷A含量的方法。本试验采用高效液相色谱法对连翘酯苷A进行了含量测定，方法简单，准确度、精密度、灵敏度等指标均符合要求，可作为检测和控制该制剂的含量指标。
1 仪器和试药
美国安捷伦1100（VWD）高效液相色谱仪；Diamonsil（钻石）C18（5μm，250 mm×4.6 mm）色谱柱；BS2010S型电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；KQ-100型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；连翘酯苷A对照品（南通飞宇生物科技，批号FY10010622，纯度＞98.0%）；银翘解毒片（吉林天药本草堂制药有限公司，Z22025699）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
Diamonsil（钻石）C18 （5μm，250mm×4.6 mm）色谱柱；流动相：乙腈-0.4%冰醋酸溶液（17︰83）；流速1 mL/min；检测波长330 nm；进样量10 μL，等梯度洗脱，理论达板数按连翘酯苷A峰计算应不低于5 000。依上述色谱条件，精密吸取连翘酯苷A对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别进样。在对照品溶液和供试品溶液色谱图相应位置上，有相同保留时间的色谱峰。见图1、2。
图1 连翘酯苷A对照品色谱图
图2 供试品色谱图
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品贮备溶液 精密称取干燥至恒重的连翘酯苷A对照品10.50 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.2.2 样品溶液 取本品10片，研细，混匀，取3 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 Hz）30 min，放冷，称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按实验条件依法测定，以峰面积与浓度计算回归方程为：Y=8.5124×103-6.3257X，r=0.999 96；表明连翘酯苷A在10.5～63.0 μg范围内线性关系良好。
2.4 中间精密度试验
取批号20110609的银翘解毒片制备供试品溶液，连续进样5次，根据峰面积计算，得连翘酯苷A的RSD为1.21%。
2.5 稳定性试验
取批号20110609的银翘解毒片制备供试品溶液，分别在 0、2、4、6、10 h进样10 μL，测定连翘酯苷A的RSD为1.23%。
表1 连翘酯苷A准确度试验结果
称样量（g） 样品含连翘酯苷A量（mg） 加入连翘酯苷A量（mg） 测得连翘酯苷A量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
1.512 2 4.54 1.49 6.06 102.0 100.75 1.37
1.508 5 4.53 1.49 6.06 102.7
1.540 6 4.62 1.02 5.64 100.0
1.561 1 4.68 1.02 5.69 99.0
1.500 7 4.50 1.25 5.76 100.8
1.525 8 4.58 1.25 5.83 100.0
2.6 重复性试验
取批号20110609的银翘解毒片粉末6份，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进样分析，结果制剂中连翘酯苷A的RSD为0.82%，表明该法重复性良好。
2.7 准确度试验
取批号20110609的银翘解毒片粉末6份，每份约1.5g，精密称定，各精密加入一定量的连翘酯苷A对照品，按供试品溶液制备方法制备，按2.1项下的色谱条件进样10 μL测定，计算回收率。结果测得回收率在99.0%～102.7%之间，平均回收率为100.75%，RSD为1.37%。见表1。
2.8 样品分析
取本品3批，每批进样5次，分别按2.2项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下进行HPLC分析，测定各指标成分的峰面积并计算含量。见表2。
表2 供试品中连翘酯苷A含量测得结果
批号 n 连翘酯苷A含量（mg/g）均值 RSD（%）
20110506 5 3.04 1.84
20110604 5 3.07 1.85
20110609 5 3.01 1.81
3 讨论
银翘解毒片收载于《中华人民共和国药典》2010年版，规定以检测连翘苷为其质量控制指标；2010年版药典连翘中增加了测定连翘酯苷A含量的方法。连翘酯苷A和连翘苷为连翘的主要成分，并未发现对银翘解毒片中连翘酯苷A进行含量测定的报道。本研究参考药典中连翘酯苷A含量测定的方法进行了测定，本法样品处理方法、测定方法简单，测定结果准确可靠，结果表明本法可用于银翘解毒片生产过程的质量控制。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1008-1009.
[2] 李倩.连翘的化学成分研究进展[J].河南中医学院学报，2005，20（117）：78-80.
[3] 李玉兰.HPLC测定不同产地连翘中连翘苷和连翘酯苷的含量[J].中国医学工程，2010，18（2）：46-52.
[4] 张海燕.连翘化学成分及药理活性的研究进展[J].中药材，2001，23（10）：657-660.
[5] 冯淑怡.连翘酯苷抗感染、解热作用研究[J].现代生物医学进展，2006，6（10）：73-75.
[6] 胡克杰.连翘酯苷体外抗病毒作用的实验研究[J].中国中医药科技，2001，8（2）：89-91.
（收稿日期：2011-09-28）
[关键词] 银翘解毒片；连翘酯苷A；高效液相色谱法
[中图分类号] R286 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2011）22-114-02
银翘解毒片具有疏风解表，清热解毒功效，用于风热感冒，症见发热头痛、咳嗽口干、咽喉疼痛。由金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗、淡竹叶、甘草等9味药组成，银翘解毒片收载于《中华人民共和国药典》（2010年版）[1]，连翘为木犀科连翘属植物连翘的干燥果实[2]，主要活性成分为以连翘苷为代表的木脂素类及连翘酯苷为代表的苯乙醇苷类 [3]，具有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用，常用连翘治疗急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等症[4]，为银翘解毒片的主要药味；连翘苷和连翘酯苷A为连翘特征成分，对金黄色葡萄球菌等11种致病菌均有极强的抑制作用，并具有抗病毒、抗炎、解热、抗氧化等作用，是迄今为止从连翘中发现的药理活性最强的活性成分之一[5-6]。2010年版药典连翘中增加了测定连翘酯苷A含量的方法。本试验采用高效液相色谱法对连翘酯苷A进行了含量测定，方法简单，准确度、精密度、灵敏度等指标均符合要求，可作为检测和控制该制剂的含量指标。
1 仪器和试药
美国安捷伦1100（VWD）高效液相色谱仪；Diamonsil（钻石）C18（5μm，250 mm×4.6 mm）色谱柱；BS2010S型电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；KQ-100型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；连翘酯苷A对照品（南通飞宇生物科技，批号FY10010622，纯度＞98.0%）；银翘解毒片（吉林天药本草堂制药有限公司，Z22025699）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
Diamonsil（钻石）C18 （5μm，250mm×4.6 mm）色谱柱；流动相：乙腈-0.4%冰醋酸溶液（17︰83）；流速1 mL/min；检测波长330 nm；进样量10 μL，等梯度洗脱，理论达板数按连翘酯苷A峰计算应不低于5 000。依上述色谱条件，精密吸取连翘酯苷A对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别进样。在对照品溶液和供试品溶液色谱图相应位置上，有相同保留时间的色谱峰。见图1、2。
图1 连翘酯苷A对照品色谱图
图2 供试品色谱图
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品贮备溶液 精密称取干燥至恒重的连翘酯苷A对照品10.50 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.2.2 样品溶液 取本品10片，研细，混匀，取3 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 Hz）30 min，放冷，称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按实验条件依法测定，以峰面积与浓度计算回归方程为：Y=8.5124×103-6.3257X，r=0.999 96；表明连翘酯苷A在10.5～63.0 μg范围内线性关系良好。
2.4 中间精密度试验
取批号20110609的银翘解毒片制备供试品溶液，连续进样5次，根据峰面积计算，得连翘酯苷A的RSD为1.21%。
2.5 稳定性试验
取批号20110609的银翘解毒片制备供试品溶液，分别在 0、2、4、6、10 h进样10 μL，测定连翘酯苷A的RSD为1.23%。
表1 连翘酯苷A准确度试验结果
称样量（g） 样品含连翘酯苷A量（mg） 加入连翘酯苷A量（mg） 测得连翘酯苷A量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
1.512 2 4.54 1.49 6.06 102.0 100.75 1.37
1.508 5 4.53 1.49 6.06 102.7
1.540 6 4.62 1.02 5.64 100.0
1.561 1 4.68 1.02 5.69 99.0
1.500 7 4.50 1.25 5.76 100.8
1.525 8 4.58 1.25 5.83 100.0
2.6 重复性试验
取批号20110609的银翘解毒片粉末6份，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进样分析，结果制剂中连翘酯苷A的RSD为0.82%，表明该法重复性良好。
2.7 准确度试验
取批号20110609的银翘解毒片粉末6份，每份约1.5g，精密称定，各精密加入一定量的连翘酯苷A对照品，按供试品溶液制备方法制备，按2.1项下的色谱条件进样10 μL测定，计算回收率。结果测得回收率在99.0%～102.7%之间，平均回收率为100.75%，RSD为1.37%。见表1。
2.8 样品分析
取本品3批，每批进样5次，分别按2.2项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下进行HPLC分析，测定各指标成分的峰面积并计算含量。见表2。
表2 供试品中连翘酯苷A含量测得结果
批号 n 连翘酯苷A含量（mg/g）均值 RSD（%）
20110506 5 3.04 1.84
20110604 5 3.07 1.85
20110609 5 3.01 1.81
3 讨论
银翘解毒片收载于《中华人民共和国药典》2010年版，规定以检测连翘苷为其质量控制指标；2010年版药典连翘中增加了测定连翘酯苷A含量的方法。连翘酯苷A和连翘苷为连翘的主要成分，并未发现对银翘解毒片中连翘酯苷A进行含量测定的报道。本研究参考药典中连翘酯苷A含量测定的方法进行了测定，本法样品处理方法、测定方法简单，测定结果准确可靠，结果表明本法可用于银翘解毒片生产过程的质量控制。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1008-1009.
[2] 李倩.连翘的化学成分研究进展[J].河南中医学院学报，2005，20（117）：78-80.
[3] 李玉兰.HPLC测定不同产地连翘中连翘苷和连翘酯苷的含量[J].中国医学工程，2010，18（2）：46-52.
[4] 张海燕.连翘化学成分及药理活性的研究进展[J].中药材，2001，23（10）：657-660.
[5] 冯淑怡.连翘酯苷抗感染、解热作用研究[J].现代生物医学进展，2006，6（10）：73-75.
[6] 胡克杰.连翘酯苷体外抗病毒作用的实验研究[J].中国中医药科技，2001，8（2）：89-91.
（收稿日期：2011-09-28）