基于Box Behnken响应面法优化口腔模拟环境IgY抑制牙龈卟啉单胞菌增殖

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【目的】利用Box Behnken响应面法研究免疫球蛋白Y(Ig Y)影响牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)的生长繁殖特性,发现口腔模拟环境中P.gingivalis的响应值与Ig Y剂量、初始P.gingivalis数量、培养时间的关系。【方法】以P.gingivalis最终的菌落数为评价指标,通过单因素试验研究培养时间、Ig Y剂量和初始P.gingivalis数量的最佳条件,再依据Box Behnken中心组合原则设计三因素三水平响应面试验进行优化,评价Ig Y的抑制效果。优化得到的试验条件重复3次,以验证模型的准确性。【结果】单因素试验结果表明,以180 mmol/L的Ig Y剂量,2×10~6 CFU/m L的初始P.gingivalis数量,37°C厌氧培养4 h,口腔模拟环境Ig Y对P.gingivalis繁殖的影响达到最佳状态。通过Design Expert 8.0软件对回归方程的分析得到各因素最佳条件为:Ig Y剂量165 mmol/L、初始P.gingivalis数量2×10~6 CFU/m L、培养时间4.5 h。采用优化实验条件,重复3次试验,P.gingivalis最终菌落数是5.92×10~5 CFU/m L,与模型预测值5.85×10~5 CFU/m L相对误差1%,方差分析表明模型P值显著,缺失值P值不显著,理论值与实测值拟合良好。【结论】Ig Y能显著抑制牙龈卟啉单胞菌的增殖,优化后口腔模拟环境中的P.gingivalis最终菌落数显著降低,回归模型能够预测口腔模拟环境中P.gingivalis的增殖。 【Objective】 Box Behnken response surface methodology was used to study the effects of Ig Y on the growth and reproduction of Porphyromonas gingivalis. The response of P. gingivalis in oral simulated environment was correlated with Ig Y dose, The relationship between initial P.gingivalis number and culture time. 【Method】 The final colonies of P. gingivalis were used as evaluation indexes to study the optimum conditions of incubation time, Ig Y dose and initial P. gingivalis number by single factor experiment and then design the three-factor and three-level response according to the principle of Box Behnken center Surface tests were optimized to evaluate the inhibitory effect of IgY. The optimized test conditions were repeated three times to verify the accuracy of the model. 【Result】 The results of single factor test showed that Ig Y at 180 mmol / L, initial P.gingivalis at 2 × 10 ~ 6 CFU / mL, anaerobic at 37 ° C for 4 h, P.gingivalis reproductive effects to achieve the best condition. The optimal conditions of each factor were obtained by Design Expert 8.0 software: 165 mmol / L Ig Y, 2 × 10 ~ 6 CFU / ml initial P.gingivalis and 4.5 h culture time. The optimized experiment conditions were repeated three times. The final colony number of P.gingivalis was 5.92 × 10 ~ 5 CFU / m L, which was 1% relative to the predicted value of 5.85 × 10 ~ 5 CFU / mL. The ANOVA showed that the model P The value of P is not significant, and the theoretical value is in good agreement with the measured value. 【Conclusion】 Ig Y can significantly inhibit the proliferation of P. gingivalis. The final colonies of P. gingivalis in the oral simulated environment were significantly reduced, and the regression model was able to predict the proliferation of P. gingivalis in oral simulated environment.
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