观察不同胎龄大鼠胚胎肠神经系统(enteric nervous system, ENS)中Neurexin Ⅱ基因的表达,探讨Neurexin Ⅱ基因与ENS发育的时间相关性及与肠神经元发育异常性疾病的可能关系。
方法清洁级健康Wistar大鼠用随机数字表法随机分组后,单独交配受孕。麻醉后处死孕龄16 d、18 d和20 d孕鼠及出生第1天乳鼠,手术取胚胎第16天(E16组)、18天(E18组)、20天(E20组)和出生第1天(Ep0组)大鼠近回盲部约1.0 cm结肠样本,E16组、E18组、E20组、Ep0组样本数量分别为78、82、69和60个。运用免疫组织化学染色、Western-blotting及qRT-PCR实验方法检测各标本Neurexin Ⅱ基因在蛋白和mRNA水平的表达。
结果免疫组织化学染色结果显示Neurexin Ⅱα蛋白主要表达于结肠肌间神经丛,在黏膜下神经丛亦有少量表达,其表达量自胚胎第16天至出生第1天,随胚胎逐渐发育表达逐渐增加。Western-blotting结果显示Neurexin Ⅱα蛋白相对含量在E16、E18、E20和Ep0组分别为0.054±0.009、0.106±0.020、0.215±0.013和0.280±0.030,相对表达量随胚胎发育逐渐增加,组间差异比较与两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05),与免疫组化结果趋势一致。qRT-PCR结果显示NeurexinⅡ基因在mRNA水平E16、E18、E20和Ep0组中相对表达分别为0.390±0.029、0.552±0.054、0.748±0.065和1.000±0.000,与蛋白水平表达趋势一致,组间差异比较与两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论NeurexinⅡ基因与ENS发育具有时间相关性;若其在ENS发育过程中的某一时间点出现异常,可能导致肠神经元发育异常性疾病的发生。